水楊酸鈉對細(xì)菌內(nèi)毒素引起的大鼠耳蝸誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)的影響.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文水楊酸鈉對細(xì)菌內(nèi)毒素引起的大鼠耳蝸誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)的影響姓名：穆恩申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師：姜學(xué)鈞20020601(2)免疫組織化學(xué)檢查：于注射LPS后每次檢測ABR后每組取4只動物處死。麻酵下開胸，4℃生理鹽水經(jīng)心臟灌流，沖出全部紅細(xì)胞后4％多聚甲醛灌流固定。斷頭，快速取出聽泡，分離出耳蝸，蝸尖打孔，搿放圜鬻、卵圜蜜，將蓐蝸置子梗同邂定液中24小時。甲酸一甲酸鈉溶液脫鈣～周，每日更換脫

2、鈣液。再移入30％蔗糖溶液4℃下過夜。OCT包埋，沿蝸轆乎行方內(nèi)行10txxn厚切片準(zhǔn)備作免疫組化染色(SABC法)。待切片在空氣中干燥后，入3％過氧化氫溶液lO分錚去除海源援過氧化物酶；正常搬莩蠱游室溫20分鐘封閉；加一抗(兔抗鼠iNOS單克隆抗體)，4。C過夜；褥熬二抗《生物索像羊挽兔IgG)，室灄孵育勰分鐘后熱鏈霉親聯(lián)索一生物素一道氧化物酶復(fù)合物(streptavidin—biotin—peroxidasecomplex，SABC

3、)37℃菠應(yīng)∞分錚；二氮基聯(lián)苯胺顯色，巍鏡下控制反應(yīng)時間，蒸餾水終止顯色，梯度灑精脫水，二甲苯透明，中性樹黢封片，光鏡下殘察?？杖φ照餚BS代替一抗，其余步驟不變。采用MetaMoph電子計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)，測定iNOS陽性反應(yīng)物的平均灰度馕，以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，灰度藿越犬，說驥組化反應(yīng)程度越低。锫組ABR反應(yīng)閾也以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SAS統(tǒng)計(jì)分柝較終對結(jié)果進(jìn)褥方差分析，戥鉸差冥觸顯著性。縫祭1。注射LPS戇右琿ABR發(fā)應(yīng)閾爨顯舟高，莢