利用弱病毒載體表達(dá)PvSR2基因降低煙草植株重金屬鎘含量的研究.pdf

1、近年來，重金屬污染成為了一個嚴(yán)重問題，土壤鎘（Cd）污染成為影響我國食品安全的重要因素之一。在農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)過程中控制農(nóng)作物重金屬含量是治理農(nóng)產(chǎn)品重金屬污染的重要環(huán)節(jié)。本文對國內(nèi)外治理農(nóng)產(chǎn)品重金屬污染的現(xiàn)狀和現(xiàn)有治理重金屬污染的技術(shù)進(jìn)行了綜述。針對治理農(nóng)產(chǎn)品重金屬污染難的問題，本文開展了利用弱病毒載體pCB-CMVF209-no2b表達(dá)抗重金屬基因PvSR2降低煙草植株重金屬鎘含量的研究。
　　1.含PvSR2基因的重組黃瓜花葉病毒載

2、體pCB-CMVF209-PvSR2的構(gòu)建。以黃瓜花葉病毒弱毒力載體pCB-CMVF209-no2b為基礎(chǔ)載體，采用雙酶切連接法構(gòu)建了含PvSR2基因的重組弱病毒載體pCB-CMVF209no2b-PvSR2。經(jīng)PCR鑒定和測序鑒定，表明PvSR2基因載體構(gòu)建成功。
　　2.表達(dá)PvSR2基因?qū)煵葜仓曛兄亟饘冁k含量的影響研究。試驗設(shè)PvSR2、Bar1、Bar2、空載體、Mock處理，3次重復(fù)。其中采用農(nóng)桿菌浸潤法對4-6葉齡的

3、本生煙苗分別接種重組弱病毒載體，接種10天后對本生煙植株土進(jìn)行施鎘（鎘離子濃度：2.5mg/kg土）處理，施鎘15天后收集煙草葉樣，并采用耦合等離子體發(fā)射光譜儀進(jìn)行鎘離子含量檢測。檢測結(jié)果表明，與其它處理比較，接種了含PvSR2的重組病毒載體pCB-CMVF209no2b-PvSR2的處理植株鎘含量極顯著低，是 Mock處理組鎘含量的4.42％，平均值為0.6433mg/kg；空載體處理為12.2367mg/kg；Mock處理為14.5

4、667mg/kg；Bar1處理為11.8667mg/kg；Bar2處理為11.4233mg/kg。
　　3.重組CMV病毒基因在煙草中表達(dá)情況檢測。將各處理煙草接種農(nóng)桿菌液10天后采集葉樣提取總RNA，然后進(jìn)行RT-PCR檢測。結(jié)果表明重組載體處理的病毒基因在煙草中都成功表達(dá)，PvSR2基因成功表達(dá)。
　　綜合分析表明，利用弱病毒載體在煙草植株中表達(dá)PvSR2基因極顯著降低了煙草植株中重金屬鎘含量，增強(qiáng)了植株對重金屬鎘的抗性