重金屬鎘免疫檢測方法的研究.pdf

1、隨著現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展，重金屬污染問題日益嚴重，對人類健康和生態(tài)環(huán)境造成了重大的影響。本文建立了一套用于監(jiān)測中藥中白芷和水樣品中的重金屬鎘殘留的快速檢測技術，包括酶聯(lián)免疫法(ELISA)和膠體金免疫層析測定法(CGIA)，作為批量樣品的篩選方法和現(xiàn)場檢測的便捷工具。
　　使用雙功能螯合劑1-(4-異硫氰酸芐基)-乙二胺四乙酸(ITCBE)螯合重金屬鎘并偶聯(lián)匙孔血藍蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)，分別制得免疫原和包被抗原，免疫原

2、免疫新西蘭大耳白兔后，從兔子的血清中得到了針對重金屬鎘高特異性的多克隆抗體。
　　在優(yōu)化了包被抗原包被量、抗體稀釋倍數(shù)、離子強度、pH值和封閉液的基礎上，建立了重金屬鎘間接競爭ELISA標準抑制曲線，方法的靈敏度(IC50)為4.18μg/L，最低檢出限LOD(IC15)為0.38μg/L。除了與重金屬汞螯合物和鉻螯合物的交叉反應分別為10.6％和1.8％外，與其他金屬螯合物的交叉反應都小于03％。選取中藥白芷、自來水和河水樣品作

3、為研究對象，進行了重金屬鎘在樣品中的添加回收實驗，結果表明重金屬鎘的平均回收率在90.54％-115.36％，變異系數(shù)在1.35％-9.33％之間。為了進一步驗證ELISA方法的準確性，本文使用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)法檢測樣品中重金屬鎘的含量。在中藥白芷樣品中兩種方法檢測結果的線性回歸方程為y=1.087x-0.029，R2為0.994。在水樣品中兩種方法檢測結果的線性回歸方程為y=0.987x-0.085，R2為0.98

4、6。以上結果表明本文建立的ELISA具有很高的準確度和精確度，適用于中藥白芷和水樣品中重金屬鎘的殘留分析。
　　同時，以膠體金作為抗體標記物，建立了免疫層析試紙條快速檢測方法。采用檸檬酸三鈉還原法制備粒徑為20nm膠體金，優(yōu)化好標記抗體的最適pH值和最適抗體量后，制備了膠體金標記的抗體并噴涂在玻璃纖維墊上作為結合釋放墊。包被抗原和羊抗兔二抗分別作為檢測帶和質控帶被固定在硝酸纖維素膜(NC膜)上，最后組裝成條用于檢測。本文建立的試紙