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文檔簡介
1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文原發(fā)性腎病綜合征患兒激素沖擊治療前后白細胞介素8基因表達姓名:羅鋼申請學位級別:碩士專業(yè):兒科學指導教師:姜紅2002.3.12PBMCIL一8mRNA表達檢測:觀察組(分治療前組、治療后組):20例隨機選自上述30例患者中,其中單純型13例,腎炎型7例。對照組:8例隨機選自上述18例健康兒童中。二、實驗試劑和儀器人IL一8ELISA試劑盒購于深圳晶美生物工程有限公司;Trizol購于GIBCOBRLUSA公司;
2、反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于GIBCOBRLUSA公司;EL一309(uSA)全自動酶標儀;PTC一200MJRESERCHUSAPCR擴增儀;GIS700D天能數(shù)碼凝膠掃描分析成像系統(tǒng)等。實驗方法1標本采集:激素沖擊治療(甲基強的松龍30mg/Kg靜脈滴注,連三天)前和沖擊后(沖擊結(jié)束第二天)分別采集靜脈血2ml和肝素抗凝血5ml。2ELISA試劑盒檢測靜脈血IL一8:參照使用說明,反應后標本即刻測量0D伽。值(5分鐘內(nèi))。繪制標準曲線,算出樣本
3、中IL一8的濃度。3RT—PCR檢測PBMCIL一8mRNA表達:按照Trizol說明書提取總RNA;按照GIBCOBRL逆轉(zhuǎn)錄試劑盒手冊合成cDNA第一條鏈后進行PCR擴增(94℃變性5分鐘后,以94℃30秒、55℃1分鐘、72℃2分鐘的順序循環(huán)35次,最后72。C延伸10分鐘)。產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙啶染色,經(jīng)GIS700D天能數(shù)碼凝膠掃描分析成像系統(tǒng)分析照相。IIJ一8引物序列:Upwardmer:5:從GGAACC^lIC
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