重慶市柑桔衰退病毒株系比對(duì)研究.pdf

1、由柑桔衰退病毒(Citrustristezavirus，CTV)引起的柑桔衰退病是一種具有經(jīng)濟(jì)重要性的柑桔病毒病害，主要通過(guò)嫁接和蚜蟲在世界各柑桔產(chǎn)區(qū)廣泛傳播流行。我國(guó)廣泛分布著CTV的各種株系及其強(qiáng)力媒介昆蟲褐色桔蚜(ToxopteracitricidaKirkaldy)，這將對(duì)我國(guó)的柑桔產(chǎn)業(yè)造成潛在的威脅。重慶由于自然資源、生態(tài)條件得天獨(dú)厚，是世界上柑桔生產(chǎn)的最適宜產(chǎn)區(qū)之一，柑桔也是最具競(jìng)爭(zhēng)力的優(yōu)勢(shì)作物。全市40個(gè)區(qū)縣(市)中有31

2、個(gè)區(qū)縣(市)種植柑桔，其中江津、開縣、奉節(jié)、長(zhǎng)壽、萬(wàn)州等區(qū)縣(市)是重慶柑桔主產(chǎn)區(qū)。本論文綜合應(yīng)用CTVCPG/HinfⅠ限制性片段多態(tài)性(RFLP)組群分析以及指示植物鑒定等方法，調(diào)查重慶9個(gè)柑桔主產(chǎn)區(qū)田間樣品CPG/HinfⅠRFLP組群構(gòu)成情況；通過(guò)單蚜傳毒對(duì)三個(gè)毒源進(jìn)行分離純化，比較不同CPG/HinfⅠRFLP組群的蚜傳特性和部分蚜傳前后分離株的CPG、p20和p18基因序列，對(duì)不同組群分離株在這三個(gè)基因上的同源性關(guān)系進(jìn)行比對(duì)

3、。主要研究結(jié)果如下： 1.重慶柑桔主產(chǎn)區(qū)田間樣品CTVCPG/HinfⅠRFLP組群構(gòu)成初步分析： (1)直接組織點(diǎn)免疫(DTBIA)方法篩選感染CTV的樣品：對(duì)采自重慶市9個(gè)柑桔主產(chǎn)區(qū)的243株甜橙和柚類樣品進(jìn)行DTBIA檢測(cè)，結(jié)果表明其中193株樣品感染了CTV，占檢測(cè)樣品總數(shù)的79.4﹪，其中185株甜橙樣品感病率高達(dá)100﹪，58株柚類樣品感病率為13.8﹪，說(shuō)明CTV在我市甜橙上分布極為普遍。 (2)重

4、慶柑桔主產(chǎn)區(qū)CTVCPG/HinfⅠRFLP組群構(gòu)成分析：所采集樣品的CPG/HinfIRFLP組群構(gòu)成情況如下：①單一組群侵染率為42.0﹪，混合組群侵染率為58.0﹪，其中單一組群侵染又和柑桔種類有密切關(guān)系，在甜橙上以第3組群侵染為主，在柚類上以第6組群侵染為主。②同一甜橙品種在不同地區(qū)，其CPG/HinfⅠRFLP組群的構(gòu)成情況會(huì)有所變化，主要體現(xiàn)在混合侵染中。③不同甜橙品種其CPG/HinfⅠRFLP組群的構(gòu)成情況也有所差異：其

5、中奉節(jié)72-1、開橙72-1以3,6混合組群侵染為主，紐荷爾臍橙、雙溪12＃錦橙和紅肉臍橙以第3組群侵染為主，伏令夏橙和錦橙78-1以1,3,6混合組群侵染為主。④不同地區(qū)的甜橙具有不同的CPG/HinfⅠRFLP優(yōu)勢(shì)組群，其中長(zhǎng)壽的優(yōu)勢(shì)組群是CPG/HinfⅠRFLP第3、1、6組群；江津、涪陵、忠縣和萬(wàn)州的優(yōu)勢(shì)組群是CPG/HinfⅠRFLP第3組群；奉節(jié)與開縣的優(yōu)勢(shì)組群是CPG/HinfⅠRFLP第3、6組群。 (3)重慶

6、柑桔主產(chǎn)區(qū)甜橙CPG/HinfⅠRFLP組群構(gòu)成比例統(tǒng)計(jì)分析：對(duì)7個(gè)甜橙主產(chǎn)區(qū)的185個(gè)樣品進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)在U0.05和U0.01顯著水平下的兩個(gè)采樣地區(qū)的相互比較中，其CPG/HinfⅠRFLP組群構(gòu)成比例在第1、6組群和單一的3組群侵染上存在顯著差異，其它各組群沒(méi)有顯著差異。 2.不同CPG/HinfⅠRFLP組群CTV的單蚜傳毒分析： (1)三種CTV毒源的單蚜傳毒：DY4-60(Ⅰ)累計(jì)單蚜傳50株，其中9株

7、感染CTV，陽(yáng)性檢出率為18.0﹪，全部是第6組群分離株；LJ累計(jì)單蚜傳60株，沒(méi)有檢測(cè)到感染CTV的樣品，陽(yáng)性檢出率為0；EDG累計(jì)單蚜傳12株，其中3株感染CTV，陽(yáng)性檢出率為25.0﹪，有2株是第1組群分離株，另外一株仍然為1,2,3混合組群分離株。 (2)蚜傳前后CPGSSCP分析與CPG/HinfⅠRFLP組群分析的比較：上述毒源及其單蚜傳毒分離物的CPGSSCP模式與CPG/HinfIRFLP組群較好地一一對(duì)應(yīng)。

8、 (3)部分蚜傳前后分離物CPG、p20和p18基因序列分析：①毒源EDG蚜傳前后的分離株在CPG的同源性上只有89.4﹪，在p20基因的同源性上達(dá)95.4﹪，在p18基因的同源性上高達(dá)99.7﹪。②毒源DY4-60(Ⅰ)蚜傳前后的分離株在CP基因的同源性上達(dá)99.0﹪，在p20基因的同源性上達(dá)98.2﹪左右，在p18基因的同源性上則高達(dá)99.5﹪。③毒源EDG的分離株與毒源DY4-60(Ⅰ)的分離株在CPG、p20和p18三個(gè)基因