聚乳酸-納米羥基磷灰石-絲素蛋白引導(dǎo)骨再生膜的制備及其細(xì)胞相容性研究.pdf

1、近年來，引導(dǎo)骨再生術(shù)(Guided Bone Regeneration，GBR)在牙周、種植及口腔頜面外科領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛。其中，屏障膜材料是GBR的關(guān)鍵。關(guān)于引導(dǎo)骨再生術(shù)的研究很多，在膜材料的開發(fā)研制、應(yīng)用等方面，許多學(xué)者做了大量的工作，但目前國內(nèi)關(guān)于這方面的研究主要集中在臨床應(yīng)用，使用的膜材料也多為進口，其昂貴的價格限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。本研究在前期研究工作的基礎(chǔ)上，以聚乳酸、納米羥基磷灰石、絲素蛋白為制膜原料，研制新型的

2、屏障膜材料，并對其理化性能、屏障功能及細(xì)胞相容性作初步評價，為后期的引導(dǎo)骨再生的動物實驗研究提供實驗基礎(chǔ)。
　　 第一部分、聚乳酸/納米羥基磷灰石/絲素蛋白復(fù)合膜的制備與表征
　　 目的：制備一種新型的聚乳酸/納米羥基磷灰石/絲素蛋白(polylactic acid/nano-hydroxyapatite/silk fibroin，PLLA/n-HA/SF)引導(dǎo)骨組織再生膜，并對其進行表征。以初步探討其作為引導(dǎo)骨再生屏障

3、膜的可行性。
　　 方法：采用熱致相分離法制備聚乳酸/納米羥基磷灰石/絲素蛋白(PLLA/n-HA/SF)納米纖維復(fù)合膜，通過掃描電鏡(SEM)對其形貌進行觀察，利用傅里葉紅外光譜儀(FTIR)分析所制備的復(fù)合膜的組成和結(jié)構(gòu)，并計算其孔隙率。
　　 結(jié)果：掃描電鏡顯示該復(fù)合膜具有納米纖維狀三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。纖維直徑為160～320 nm，孔徑大小為1～4μm，絲素蛋白和納米羥基磷灰石在復(fù)合膜中分散均勻;紅外光譜結(jié)果表明PLL

4、A/n-HA/SF復(fù)合膜具備聚乳酸、納米羥基磷灰石及絲素蛋白的特征峰表現(xiàn)，3種組分之間進行了良好的結(jié)合;各組膜材料的孔隙率均高于92％。統(tǒng)計學(xué)分析顯示:各組別之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=21.052，P＜0.001）。PLLA/n-HA組與PLLA/n-HA/SF差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.123)，其他的兩組間比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.004)。
　　 結(jié)論：本方法制備的PLLA/n-HA/SF復(fù)合膜具有良好的微觀結(jié)構(gòu)和孑L隙率

5、。
　　 第二部分、聚乳酸/納米羥基磷灰石/絲素蛋白復(fù)合膜的細(xì)胞屏障作用研究
　　 目的：考察PLLA、PLLA/n-HA及PLLA/n-HA/SF3種膜材料的細(xì)胞屏障功能。
　　 方法：將人牙齦成纖維細(xì)胞（human gingival fibroblast，HGF）接種在3種膜材料上進行培養(yǎng)。3d時用掃描電鏡觀察材料正、反兩面及斷面，以了解細(xì)胞在3種膜材料上的生長狀況。
　　 結(jié)果：HGF在3種膜材料的

6、正面黏附、伸展。材料的斷面及反面未見細(xì)胞長入。
　　 結(jié)論：本方法制備的PLLA、PLLA/n-HA及PLLA/n-HA/SF3種復(fù)合膜均具有良好的細(xì)胞屏障作用，滿足引導(dǎo)骨再生膜的基本要求。
　　 第三部分、聚乳酸/納米羥基磷灰石/絲素蛋白復(fù)合膜的細(xì)胞相容性實驗研究
　　 目的：研究PLLA、PLLA/n-HA及PLLA/n-HA/SF3種膜材料的細(xì)胞相容性，為引導(dǎo)骨再生膜的進一步研究提供實驗基礎(chǔ)。
　　

7、 方法：將MG63細(xì)胞以5×103/ml濃度接種在3種膜材料上進行培養(yǎng)。在1h，4h，7h和1d，3d，5d時用CCK-8法測定細(xì)胞的黏附和增殖情況，在3d時用掃描電鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)。
　　 結(jié)果：相對于純PLLA膜和PLLA/n-HA復(fù)合膜，PLLA/n-HA/SF復(fù)合膜可以更好地提高細(xì)胞在其上的黏附和增殖能力。掃描電鏡觀察也表明，MG63細(xì)胞可以在PLLA/n-HA/SF復(fù)合膜上很好地呈梭形/不規(guī)則多邊形生長，細(xì)胞伸出長長的