SDC-1、HLA-G和MMP-9在子宮內(nèi)膜異位癥中的檢測(cè)及其意義.pdf

1、背景和目的:
　　子宮內(nèi)膜異位癥(endo metrio sis，EMS)是指子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)種植在子宮腔以外引起的一種良性疾病。其發(fā)病機(jī)制至今尚未明了，EMS表現(xiàn)出鄰近器官種植和破壞，周圍組織的侵潤(rùn)，遠(yuǎn)處部位轉(zhuǎn)移，無(wú)限制的生長(zhǎng)，治療徹底更困難和快速?gòu)?fù)發(fā)等常見的生物學(xué)行為，是具有類似惡性腫瘤生物學(xué)特質(zhì)的一種良性病變，因此影響腫瘤細(xì)胞脫離、遷移、粘附、降解及浸潤(rùn)增殖過(guò)程的相關(guān)各種分子被廣泛應(yīng)用于EMS的研究。
　　多配體蛋白

2、聚糖-1(Syndecan-1，SDC-1)屬于跨膜黏蛋白聚糖家族成員，是一個(gè)經(jīng)典的生長(zhǎng)因子、血管生成因子、趨化因子，其硫酸肝素側(cè)鏈(heparan sulfate，HS)鏈具有廣泛的結(jié)構(gòu)異質(zhì)性，結(jié)合細(xì)胞外基質(zhì)(extra cellular matrix，ECM)、細(xì)胞表面黏附分子、生長(zhǎng)因子、酶等，參與細(xì)胞增殖、黏附、遷移和血管生成等過(guò)程。人類白細(xì)胞抗原G(human leucocyte antigen-G，HLA-G)是非經(jīng)典性的MH

3、C-Ib類抗原分子，通過(guò)抑制NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的活性，參與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。ECM的降解是EMS異位內(nèi)膜細(xì)胞侵襲和種植的主要途徑，而MMPs在ECM的降解中超重要作用。基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metallo proteinase-9，MMP-9)可降解ECM，穿透細(xì)胞的基底膜，通過(guò)與整合素的相互作用，從而加強(qiáng)細(xì)胞-細(xì)胞間的黏附作用，同時(shí)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的出芽，利于新生血管的形成。
　　目前，國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道關(guān)于聯(lián)合檢

4、測(cè)SDC-1、HLA-G和MMP-9在EMS患者中表達(dá)水平的研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化S-P法(immunohistochemicalS-Pmethod)和酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immune sorbent assay，ELISA)對(duì)EMS患者異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜組織及血清中SDC-1、HLA-G和MMP-9的表達(dá)水平進(jìn)行研究，分析其表達(dá)水平與EMS臨床分期的關(guān)系，并分析三者之間的關(guān)系，以探討SDC-1、HLA-G和M

5、MP-9在EMS發(fā)病機(jī)制中的作用，為EMS的發(fā)病機(jī)制和臨床研究提供理論依據(jù)。
　　材料和方法:
　　1.研究對(duì)象
　　1.1.隨機(jī)抽取2012年7月至2013年9月我院婦科收治的經(jīng)腹腔鏡及病理診斷證實(shí)為卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的患者88例。采用1985年美國(guó)生育學(xué)會(huì)修訂的EMS臨床分期標(biāo)準(zhǔn)(R-AFS)進(jìn)行分期:Ⅰ-Ⅱ期44例，Ⅲ-Ⅳ期44例，對(duì)照組為35例同期入院行宮腹腔鏡手術(shù)的子宮縱膈患者。
　　1.2.對(duì)88例

6、卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫標(biāo)本進(jìn)行蘇木素伊紅(HE)染色后篩選納入實(shí)驗(yàn)組60例，Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期各30例，取卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫部分囊壁作為標(biāo)本，納入異位內(nèi)膜組;60例EMS患者中48例患者，Ⅰ-Ⅱ期25例，Ⅲ-Ⅳ期23例，因有生育要求同時(shí)行宮腔鏡檢查，排除內(nèi)膜病變，取宮腔在位內(nèi)膜作為標(biāo)本，納入在位內(nèi)膜組;35例子宮縱膈患者的標(biāo)本，排除EMS、子宮內(nèi)膜病變及其它疾病，取子宮正常內(nèi)膜作為標(biāo)本，納入對(duì)照組。
　　1.3.123例均于術(shù)前清

7、晨抽取空腹肘靜脈血。
　　1.4.以上納入標(biāo)準(zhǔn):(1)育齡期女性，月經(jīng)周期基本正常;(2)3個(gè)月內(nèi)無(wú)激素類藥物應(yīng)用史;(3)無(wú)其他系統(tǒng)疾病，尤其排除惡性腫瘤;(4)無(wú)急、慢性炎癥及其他盆腔疾病;(5)所取標(biāo)本時(shí)間均為患者處于月經(jīng)周期的增殖期。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法
　　2.1.利用免疫組化S-P法檢測(cè)EMS患者異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及對(duì)照組中SDC-1、HLA-G和MMP-9的表達(dá)水平。
　　2.2.利用ELISA法檢測(cè)

8、EMS患者及對(duì)照組血清中SDC-1、HLA-G和MMP-9的表達(dá)水平。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，定量資料的統(tǒng)計(jì)分析以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示;兩組獨(dú)立樣本的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);兩兩間比較采用最小顯著性差異法(LSD-t)檢驗(yàn);多組間比較采用單因素方差(ANOVA)分析;相關(guān)性采用Pearson直線相關(guān)性分析;敏感度和特異度采用應(yīng)用受試者工作特征曲線(ROC)

9、分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1.EMS組和對(duì)照組組織中SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白表達(dá)水平
　　SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白主要表達(dá)于EMS患者異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜組織的腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)中，間質(zhì)細(xì)胞的胞質(zhì)也有少量表達(dá)。
　　異位內(nèi)膜組、在位內(nèi)膜組和對(duì)照組組織中SDC-1蛋白的平均光密度(OD)值分別為:146.35±19.56、114.86±13.67和70.30±11.23，(

10、F=277.44,P=0.000);HLA-G的平均OD值分別為:152.69±16.08、129.06±8.93和61.95±9.40，(F=654.84，P=0.000);MMP-9的平均OD值分別為:148.11±22.88、117.57±8.72和83.98±9.74，(F=188.97，P=0.000)。兩兩比較SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白在異位內(nèi)膜組、在位內(nèi)膜組中的平均OD值均高于對(duì)照組(P＜0.05)，SDC-1

11、、HLA-G和MMP-9蛋白在異位內(nèi)膜組的平均OD值高于在位內(nèi)膜組（P＜0.05）。
　　EMS異位內(nèi)膜組中，SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白在Ⅰ-Ⅱ期的平均OD值分別為:129.33±5.08、139.83±7.38和130.85±15.21，在Ⅲ-Ⅳ期的平均OD值分別為:163.37±12.39、165.55±11.39和165.36±14.76;在EMS在位內(nèi)膜組中，SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白在Ⅰ-Ⅱ期的平

12、均OD值分別為103.39±8.02、122.64±4.03和110.61±6.67，在Ⅲ-Ⅳ期的平均OD值分別為126.33±6.57、135.49±7.77和124.54±3.10。SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白的平均光度值在EMS異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜組織Ⅲ-Ⅳ期均高于Ⅰ-Ⅱ期（P均＜0.05）。
　　2.EMS組和對(duì)照組血清中SDC-1、HLA-G和MMP-9的表達(dá)水平
　　SDC-1、HLA-G和MMP-9在E

13、MS組血清中的表達(dá)水平分別為:3888.34±607.38μg/L、3888.34±607.38μg/L和15.42±2.61μg/L，在對(duì)照組血清中的表達(dá)水平分別為:1481.91±482.49μg/L、5.77±1.82μg/L和9.01±3.15μg/L;SDC-1、HLA-G和MMP-9在EMS患者血清中的表達(dá)水平高于對(duì)照組（P均＜0.05）。
　　EMS組中SDC-1、HLA-G和MMP-9在Ⅰ-Ⅱ期的表達(dá)水平分別為:3

14、463.20±352.24μg/L、9.98±2.30μg/L和14.84±2.871μg/L，在Ⅲ-Ⅳ期的表達(dá)水平分別為:4313.48±502.44μg/L、11.50±1.54μg/L和16.01±2.20μg/L;SDC-1、HLA-G和MMP-9在EMS組血清中Ⅲ-Ⅳ期的表達(dá)水平明顯高于Ⅰ-Ⅱ期（P均＜0.05）。
　　3.經(jīng)ROC曲線分析表明SDC-1、HLA-G和MMP-9聯(lián)合檢測(cè)診斷EMS的敏感性和特異性分別為93

15、.18％和94.28％，三者聯(lián)合診斷EMS的敏感度和特異度明顯高于單獨(dú)檢測(cè)或者兩兩聯(lián)合檢測(cè)。
　　4.EMS組和對(duì)照組中SDC-1、HLA-G和MMP-9蛋白之間相關(guān)性分析
　　EMS異位內(nèi)膜組中SDC-1、HLA-G與MMP-9的表達(dá)水平均呈正相關(guān)(r=0.338，P=0.008;r=0.302，P=0.019);SDC-1與HLA-G的表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性(r=0.185,P=0.157)。
　　EMS在位內(nèi)膜組中SD

16、C-1、HLA-G與MMP-9的表達(dá)水平均呈正相關(guān)(r=0.476，P=0.002;r=0.601，P=0.000);SDC-1與HLA-G的表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性(r=0.161，P=0.273)。
　　對(duì)照組中SDC-1與MMP-9、HLA-G的表達(dá)水平兩兩之間分別無(wú)顯著相關(guān)性(r=0.052,P=0.752;r=0.067,P=0.651;r=0.107，P=0.512)。
　　EMS組血清中SDC-1、HLA-G與MMP-

17、9的表達(dá)水平均呈正相關(guān)(r=0.683，P＜0.05;r=0.456,P＜0.05);SDC-1與HLA-G的表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性(r=0.212，P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.SDC-1、HLA-G和MMP-9可能參與EMS的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程;
　　2.聯(lián)合檢測(cè)SDC-1、HLA-G和MMP-9對(duì)EMS的無(wú)創(chuàng)診斷有一定的參考價(jià)值;
　　3.SDC-1、HLA-G與MMP-9在EMS的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能有協(xié)同作