HLA-G與滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲及子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病相關(guān)性的研究.pdf

1、胚胎著床的過程是生命中最復(fù)雜和最神秘的過程之一，其調(diào)控機(jī)理是生物學(xué)家長(zhǎng)期以來不懈探索的重大課題。自1829年Lobstein等提出腫瘤胚胎性起源概念以來，胚胎植入與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移生物學(xué)行為的相似性研究日益受到重視。旺盛增殖分裂的受精卵定向地向子宮內(nèi)遷移，與接受態(tài)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞進(jìn)行對(duì)話，進(jìn)而啟動(dòng)粘附、遷移、基質(zhì)降解、侵蝕母體血管及新生血管生成等信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，生理性侵襲(physiologicalinvasion)子宮內(nèi)膜并增殖分化形成胎兒及

2、其附屬物，因此，認(rèn)為“假惡性”的囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞及惡性腫瘤細(xì)胞在細(xì)胞增殖分化、侵襲信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、血管侵蝕和新生血管形成、免疫逃逸及細(xì)胞凋亡等諸多方面具有驚人的相似性。但胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞僅侵襲母體子宮內(nèi)膜的上三分之一左右，即胚胎滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲是有節(jié)制性的侵襲。 滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲行為是由一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)精確調(diào)控的，實(shí)際上是在甾體激素的協(xié)同作用下，通過子宮和胚胎所表達(dá)的各種細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、血管發(fā)生因子、蛋白酶類激活/抑制因子及細(xì)胞凋亡

3、調(diào)控因子等，在時(shí)間和空間上相互協(xié)同作用下完成的，但對(duì)此過程的了解尚處于起始階段。 在胚胎植入過程中細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的降解極為關(guān)鍵，是成功妊娠的必要條件。基質(zhì)金屬蛋白酶((matrixmetalloproteinases，MMPs)是一類鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，是降解細(xì)胞外基質(zhì)的最重要酶，幾乎能降解所有的ECM成份。MMPs是胚泡滋養(yǎng)層侵入性標(biāo)志，其蛋白表達(dá)與滋養(yǎng)層細(xì)胞的最大低濃度的E2+P

4、4組(1nM)HLA-G蛋白的表達(dá)高于同濃度的P4組(p＜0.05)而低于相同濃度的E2組(p＜0.01)；濃度為10nM和100nM時(shí)HLA-G表達(dá)與P4組無明顯差異(p＞0.05)，濃度為1000nM時(shí)，HLA-G表達(dá)顯著高于單純E2及P4組(p＜0.01)。 [結(jié)論] 1.雌二醇上調(diào)EVT表達(dá)HLA-G蛋白，上調(diào)作用與其濃度關(guān)系密切，當(dāng)E2濃度小于100nM時(shí)，隨著濃度的增加E2對(duì)HLA-G蛋白的上調(diào)作用逐漸減弱；

5、當(dāng)E2濃度高于100nM時(shí)，上調(diào)作用則呈濃度依賴性。 2.上調(diào)EVT表達(dá)HLA-G蛋白，且呈量效關(guān)系。 3.E2、P4聯(lián)合作用能上調(diào)HLA-G蛋白的表達(dá)。當(dāng)E2及P4的濃度均低于100nM時(shí)，雌孕激素聯(lián)合組HLA-G表達(dá)與單純雌激素或孕激素組無明顯差異，提示生理濃度的雌激素和孕激素對(duì)HLA-G調(diào)節(jié)為拮抗作用；當(dāng)E2和P4的濃度均較高(1000nM)時(shí)，E2+P4組HLA-G蛋白表達(dá)高于單純雌激素、孕激素組，提示高濃度E2

6、和P4對(duì)HLA-G的表達(dá)呈協(xié)同作用。 第四部分HLA-G蛋白及基因在子宮內(nèi)膜異位癥在位和異位內(nèi)膜中的表達(dá) [目的] 探討人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病的關(guān)系。 [方法] 1.分組：子宮腺肌癥在位內(nèi)膜38例，異位內(nèi)膜38例；卵巢子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜30例，異位內(nèi)膜30例；對(duì)照組子宮肌瘤在位內(nèi)膜20例。 2.應(yīng)用免疫組化法和原位雜交法檢測(cè)HLA-G蛋白和基因在子宮腺肌癥、

7、卵巢子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜，子宮肌瘤患者子宮內(nèi)膜中的表達(dá)。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS13.0軟件，計(jì)數(shù)資料用秩和檢驗(yàn)，其中多組計(jì)數(shù)資料用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，兩兩比較用Mann-Whitney檢驗(yàn)。 [結(jié)果] 1.HLA-G蛋白的表達(dá)(1)EM(AM和OEM)組在位和異位內(nèi)膜：HLA-G蛋白表達(dá)于EM在位和異位內(nèi)膜腺上皮的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，表達(dá)以“++～+++”為主，間質(zhì)細(xì)胞中無表

8、達(dá)，組間對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)；兩組在位內(nèi)膜的分泌期和增生期比較均無明顯差異(p＞0.05)；HLA-G蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與臨床分期無相關(guān)性(p＞0.05)。(2)對(duì)照組：HLA-G蛋白在增生期和分泌期均不表達(dá)或呈弱表達(dá)，顯著低于與AM、OEM組在位內(nèi)膜(p＜0.05)。 2.HLA-GmRNA的表達(dá)(1)HLA-GmRNA表達(dá)于AM和OEM的在位和異位內(nèi)膜腺上皮的細(xì)胞漿，表達(dá)以“++～+++”為主，間質(zhì)細(xì)胞中無表達(dá)，

9、組間對(duì)比差異無顯著性(p＞0.05)。(2)HLA-GmRNA在對(duì)照組不表達(dá)或呈弱表達(dá)，顯著低于AM、OEM組在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜(p＜0.01)。 [結(jié)論] 1.HLA-G蛋白及基因在子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中呈強(qiáng)表達(dá)，明顯高于對(duì)照組，結(jié)果提示，HLA-G可能與EM的發(fā)病有關(guān)。 2.HLA-G蛋白及基因在子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜亦呈強(qiáng)表達(dá)，與在異位內(nèi)膜的表達(dá)無明顯差異，提示EM的異位和在位內(nèi)膜可能具有相同的生

10、物學(xué)特性，具有HLA-G高表達(dá)的在位內(nèi)膜可能是發(fā)生EM的高危人群，可以通過檢測(cè)在位內(nèi)膜HLA-G的表達(dá)預(yù)測(cè)發(fā)生EM的風(fēng)險(xiǎn)，為診斷提供信息。 3.HLA-G蛋白在AFS-r不同分期的表達(dá)無明顯差異，在增生期和分泌期子宮內(nèi)膜的表達(dá)無差異，提示HLA-G與子宮內(nèi)膜異位癥的臨床分期無明顯相關(guān)性，且HLA-G在EM的高表達(dá)貫穿于整個(gè)月經(jīng)周期，不受激素變化的影響。 [全文小結(jié)] 1.HLA-G蛋白主要表達(dá)于母胎介面具有侵襲性

11、的絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞；侵蝕性葡萄胎的滋養(yǎng)細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲力，HLA-G蛋白的表達(dá)亦最強(qiáng)。以上結(jié)果強(qiáng)烈提示：HLA-G的作用并不局限于免疫保護(hù)，其表達(dá)還與滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)。 2.HLA-G反義寡核苷酸能夠抑制HLA-G基因和蛋白的表達(dá)，其可以通過下調(diào)MMP(MMP-2、MMP-9)的表達(dá)；上調(diào)TIMP(TIMP-1、TIMP-3)、PAI-1的表達(dá)，使MMP/TIMP、uPA/PAI-1的調(diào)控失衡，同時(shí)下調(diào)VEGF的表達(dá)，

12、從而降低絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力。 3.本研究首次報(bào)道，E2上調(diào)HLA-G蛋白的表達(dá)；生理濃度的E2、P4對(duì)HLA-G的調(diào)節(jié)呈拮抗作用，高濃度E2和P4則以協(xié)同作用調(diào)節(jié)HLA-G的表達(dá)。P4上調(diào)HLA-G蛋白的表達(dá)，且呈劑量依賴性。 4.本研究首次發(fā)現(xiàn)HLA-G蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜呈強(qiáng)表達(dá)，而非EM患者的子宮內(nèi)膜則無表達(dá)或呈弱表達(dá)。結(jié)果提示，具有HLA-G高表達(dá)的在位內(nèi)膜可能是發(fā)生EM的高危人群，可以通