中國針屬線蟲分類和致病性研究及半卡盧斯屬新種描述.pdf

1、針屬線蟲（ParatylenchusMicoletzky,1922）是針科（Paratylenchidae Raski,1962）中最大的一個屬，包括100多個種，我國已報(bào)道的針屬線蟲約有20多種。針屬線蟲寄主廣泛，在多種農(nóng)作物、果樹、林木和草類根際均發(fā)現(xiàn)有高密度的該屬線蟲，有些針屬種類已證明是寄主植物的病原物。半卡盧斯屬（HemicaloosiaRay& Das,1978）線蟲隸屬于鞘總科（Hemicycliophoroidea Sk

2、arbilovich,1959）中的卡盧斯科（Caloosiinae Siddiqi,1980），目前共有9個有效種，但我國并未有該屬線蟲的報(bào)道。本研究采集了我國多個省份的植物根際土壤樣品，主要對其中的針屬線蟲進(jìn)行了分離鑒定，共確定了針屬線蟲的16個種，其中4個為針屬線蟲新種，6個為針屬線蟲的中國新紀(jì)錄種，在此基礎(chǔ)上對針屬線蟲相關(guān)種類和鑒定特征進(jìn)行了修訂，同時發(fā)現(xiàn)和證實(shí)了一個由深圳針線蟲新種引起的紅掌新病害—紅掌慢速衰退病，此外，發(fā)現(xiàn)并

3、描述了一個半卡盧斯屬線蟲新種。具體研究結(jié)果如下：
　　1.從重慶市麥冬草根和根際土壤分離并鑒定針屬線蟲一新種：重慶針線蟲新種（Paratylenchus chongqingensisn.sp.）。該針線蟲的形態(tài)特征如下：雌蟲體長為262(243–274.5)μm，口針長為23(21–24.5)μm，側(cè)線3條，唇區(qū)縊縮，略呈盤狀，陰門側(cè)膜大，尾端尖圓；雄蟲頭前端略圓，口針和食道腺退化，有短的交合刺管，尾末端呈短絲狀。本研究還獲得了3

4、條重慶針線蟲新種的ITS-rDNA序列，序列長度均為990 bp。重慶針線蟲新種的ITS序列的種內(nèi)變異為2–6 bp（0.2–0.6％）。
　　2.從廣東省廣州市的竹子根和根際土壤分離并鑒定針屬線蟲一新種：廣州針線蟲新種（Paratylenchus guangzhouensisn.sp.）。該新種的形態(tài)特征如下：雌蟲體長為233(217–247)μm，口針長為47(43–49.5)μm，側(cè)線3條，頭部圓，不縊縮，側(cè)器口呈蝴蝶結(jié)狀，

5、陰門側(cè)膜小，不明顯，尾端細(xì)圓到鈍圓；雄蟲頭部圓，口針和食道腺退化，有短的交合刺管，尾端略尖；4齡幼蟲有口針。本研究還獲得了2條廣州針線蟲新種的ITS-rDNA序列，序列長度分別為1034 bp、1035 bp，2條序列間差異為1 bp；獲得3條28S rDNA D2-D3區(qū)序列，序列長均為771bp，且3條序列間變異為0bp。
　　3.從江蘇省南京市的馬尾松根和根際土壤分離并鑒定針屬線蟲一新種：南京針線蟲新種（Paratylenc

6、hus nanjingensisn.sp.）。該新種的形態(tài)特征如下：雌蟲體長為259(243–279)μm，口針長為66(64–68)μm，側(cè)線4條，頭不縊縮，有略突出的亞中唇結(jié)構(gòu)，排泄孔位于口針基部球水平位置以前，有小的但明顯的陰門側(cè)膜，尾端細(xì)圓或亞尖；雄蟲頭截錐形，口針及食道腺退化，交合刺管短，尾端略尖。本研究獲得了3條南京針線蟲新種的ITS-rDNA序列，序列長度為1032 bp，3條序列間的差異為0–2 bp；獲得2條28S r

7、DNAD2-D3區(qū)序列，序列長度均為771bp，且2條序列間無差異，相似度為100%。
　　4.從廣東省深圳市的紅掌根和根際土壤分離檢測到高密度的針屬線蟲，經(jīng)鑒定該線蟲為一針屬線蟲新種，命名為深圳針線蟲新種（Paratylenchus shenzhenensisn.sp.）。該新種的形態(tài)特征如下：雌蟲體長為275(249–302)μm，口針長為19(17–21)μm，側(cè)線4條，頭部圓，不縊縮，有4個亞中唇瓣，側(cè)唇小，口孔附近略凹陷

8、，有明顯的陰門側(cè)膜，尾端細(xì)圓或略呈指狀；雄蟲在泄殖腔口前向腹面彎曲，從泄殖腔口后向背面彎曲；口針和食道腺退化；有明顯的交合刺管；幼蟲有口針。本研究還獲得了16條深圳針線蟲的ITS序列，序列長度為1047–1049 bp，序列間差異為0–33 bp；獲得9條28S rDNA的D2-D3區(qū)序列，序列間差異為0–6 bp。運(yùn)用柯赫氏法則研究證明，深圳針線蟲侵染紅掌根系導(dǎo)致一種新病害—紅掌慢速衰退病，受害紅掌表現(xiàn)為生長發(fā)育不良，根通常呈現(xiàn)褐色，

9、深褐色或黑色病斑。本研究建立了使用胡蘿卜愈傷組織培養(yǎng)繁殖深圳針線蟲的方法，確定了該線蟲在胡蘿卜愈傷組織上的最適培養(yǎng)溫度為25 ℃。
　　5.鑒定描述了6個針屬線蟲的中國新紀(jì)錄種，分別為：具緣針線蟲（P.costatus）、盤唇針線蟲（P.discocephalus）、長尾針線蟲（P.longicaudatus）、鋸尾針線蟲（P.serricaudatus）、變化針線蟲（P.variabilis）和變異針線蟲（P.variatus）

10、。并提出錨針線蟲和具緣針線蟲可能是艾達(dá)利摩斯針線蟲的同物異名；胚軸針線蟲（P.epicotylus）可能是盤唇針線蟲的同物異名；變異針線蟲和水生針線蟲應(yīng)是兩個有效種。
　　6.從廣東省廣州市木荷根和根際土壤采集分離并鑒定半卡盧斯屬線蟲一新種：廣州半卡盧斯線蟲新種（Hemicaloosia guangzhouensisn.sp.）。該新種的形態(tài)特征為：雌蟲體長為906(798–961)μm，體環(huán)數(shù)為298(282–313)，口針長6

11、5.5(59–69)μm，蟲體外側(cè)覆蓋一層膜狀體鞘，側(cè)區(qū)有一條縱線，受精囊中無精子，尾長130(115–145)μm，陰門到尾端體環(huán)數(shù)為63(58–69)；肛門到尾端體環(huán)數(shù)為53(49–59)；陰門和肛門間體環(huán)數(shù)為9(7–11)；雄蟲未知。本研究獲得了2條廣州半卡盧斯線蟲新種的ITS-rDNA序列，序列長度均為805 bp，序列的差異為0 bp；獲得2條28S-rDNA的D2-D3區(qū)序列，序列長度均為769 bp，序列間差異為1bp；獲

12、得2條18S-rDNA序列，序列長度為882 bp，序列間差異為1 bp。采用六種限制性內(nèi)切酶分別對廣州半卡盧斯線蟲新種ITS rDNA的PCR純化產(chǎn)物進(jìn)行酶切反應(yīng)，酶切片段大小分別為：AvaI-805bp；Bsh1236I-805bp；DraI-805 bp；HinfI-625，132，48 bp；Hin6I-586，130，78，11 bp；MspI-424，303，78 bp。
　　7.本研究分別采用ITS-rDNA序列和2