MDM2、P53、CyclinD1、Ki-67在腎母細(xì)胞瘤中的表達及相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　 采用高通量組織芯片及免疫組化技術(shù)研究MDM2、P53、CyclinD1、Ki-67蛋白在腎母細(xì)胞瘤中的表達,探討其在腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展、病理分型及發(fā)病機制中的意義。
　　 材料與方法:
　　 選擇我院2003年1月-2009年3月、年齡5個月-8歲的腎母細(xì)胞瘤患者手術(shù)存檔蠟塊標(biāo)本36例為病例組。全部病例術(shù)前均未行化療、放療及免疫治療。按NWTS組織分型標(biāo)準(zhǔn),臨床分期Ⅰ期22例,Ⅱ期14例,Ⅲ期0例

2、,Ⅳ期0例;以上各型按有無間變分為預(yù)后良好型(FH型)26例和預(yù)后不良型(UH型)10例；按病理類型分為上皮型6例、胚芽型8例、間質(zhì)型7例、和混合型15例。同時以相應(yīng)的瘤旁腎組織標(biāo)本(距腫瘤邊緣≥2cm)12例作為對照。所有標(biāo)本均經(jīng)中性甲醛固定、常規(guī)脫水、包埋、4μm切片、HE染色診斷并分組。對制成的組織芯片采取連續(xù)切片,用免疫組織化學(xué)EliVision法檢測MDM2、P53、CyclinD1、Ki-67蛋白的表達,用原位雜交方法檢測腎

3、母細(xì)胞瘤中MDM2mRNA的表達。
　　 結(jié)果:
　　 一、組織芯片結(jié)果
　　 制作出的組織芯片蠟塊內(nèi)無氣泡,四周無開裂現(xiàn)象。HE染色結(jié)果示除4點有部分脫落,3點略有移位外,其余各點均勻排布于載玻片上,沒有明顯的移位、皺縮及扭曲,完全符合實驗觀察的需要。
　　 二、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
　　 1、MDM2蛋白在腎母細(xì)胞瘤中陽性率為41.7％(15/36),瘤旁腎組織中陽性率為8.3％(1/12),

4、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在預(yù)后良好型。腎母細(xì)胞瘤中陽性率為23.1％(6/26),預(yù)后不良型中陽性率90％(9/10),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在腎母細(xì)胞瘤臨床Ⅰ期和Ⅱ期中的表達差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在腎母細(xì)胞瘤的四個不同組織學(xué)分型間的表達差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2、P53蛋白在腎母細(xì)胞瘤中陽性率為30.6％(11/36),在瘤旁腎組織12例中均無表達,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<

5、0.05)。在預(yù)后良好型腎母細(xì)胞瘤中陽性率為15.4％(4/26),預(yù)后不良型中陽性率70％(7/10),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在腎母細(xì)胞瘤臨床Ⅰ期和Ⅱ期中的表達差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在腎母細(xì)胞瘤的四個不同組織學(xué)分型間的表達差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3、CyclinD1蛋白在腎母細(xì)胞瘤中陽性率為33.3％(12/36),瘤旁腎組織12例中均無表達,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在預(yù)

6、后良好型腎母細(xì)胞瘤中陽性率為11.5％(3/26),預(yù)后不良型中陽性率90％(9/10),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在腎母細(xì)胞瘤臨床Ⅰ期和Ⅱ期中的表達差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在腎母細(xì)胞瘤的四個不同組織學(xué)分型間的表達差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 4、Ki-67蛋白的陽性表達位于細(xì)胞核內(nèi),在腎母細(xì)胞瘤中的檢出率為100％,Ki-67表達指數(shù)(KI)范圍為3％-94％,對照組12例KI范圍為0-5％,

7、兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(50.50±28.11/2.75±1.22)(P<0.01)。腎母細(xì)胞瘤中預(yù)后良好型的KI低于預(yù)后不良型的KI(42.88±28.39/71.60±15.39),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01):臨床I期的KI低于臨床Ⅱ期的KI(42.27±25.26/66.07±24.95),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；在腎母細(xì)胞瘤的四個不同組織學(xué)分型間的KI差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 5、腎母細(xì)胞

8、瘤中P53和MDM2共陽性表達10例,共陰性表達20例,P53陽性MDM2陰性1例,P53陰性MDM2陽性5例,等級相關(guān)分析顯示二者呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。
　　 6、腎母細(xì)胞瘤中P53和CyclinD1共陽性表達9例,共陰性表達22例,P53陽性CyclinD1陰性2例,P53陰性CyclinD1陽性3例,等級相關(guān)分析顯示二者呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。
　　 7、腎母細(xì)胞瘤中MDM2和CyclinD1共陽性表

9、達10例,共陰性表達19例,MDMD2陽性CycliriD1陰性5例,MDM2陰性CyclinD1陽性2例,等級相關(guān)分析顯示二者呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。
　　 8、腎母細(xì)胞瘤中P53陽性的KI高于P53陰性的KI(66.36±21.35/43.52±28.21,P<0.05)；腎母細(xì)胞瘤中MDM2陽性的KI高于MDM2陰性的KI(68.53±19.23/37.62±26.56,P<0.05)；腎母細(xì)胞瘤中的cyclinD1

10、陽性的KI高于CyclinD1陰性的KI(68.00±15.86/41.75±29.02,P<0.05).
　　 三、原位雜交結(jié)果
　　 MDM2mRNA在腎母細(xì)胞瘤中陽性表達率50％(18/36)與MDM2蛋白的陽性表達率(41.7％)基本一致。
　　 結(jié)論:
　　 1、組織芯片技術(shù)完全適用于科研工作及臨床病理滲斷,此項技術(shù)的應(yīng)用可節(jié)省時間、試劑,極大提高了效率,減少了實驗誤差。
　　 2、P5

11、3、MDM2蛋白過表達可作為判斷腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化程度的指標(biāo)；P53和MDM2在腎母細(xì)胞瘤中呈正相關(guān)性,共同促進腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展,可能作為基因治療的靶點。
　　 3、CyclinD1蛋白過表達,可作為判斷腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化程度的指標(biāo)。
　　 4、Ki-67蛋白的表達可作為判斷腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化程度的指標(biāo),亦可作為判斷臨床分期的參考指標(biāo)。
　　 5、P53、MDM2、CyclinD1蛋白過表達在腎母細(xì)胞瘤中兩