EphB2在肝癌中表達(dá)的意義及其與微血管密度之間的關(guān)系.pdf

1、簽劌盤(pán)堂2堂屋熊主班囂篁望些監(jiān)空量Ph旦2查世疆主垂堡毆盈豎叢基皇邀堡簧量廈圭四衄羞丕!正塞2cD34鼠抗人單克隆抗體IgG(北京中山生物技術(shù)有限公司)其它：氯仿、異丙醇、無(wú)水酒精、DEPc水、雙氧水、蛋白酶K、氯化鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、樹(shù)脂、蘇木素等。14主要試劑的配制50TAE電泳緩沖液：2429Tris堿、571m1冰乙酸及100m1o5m01／1EDTA(PH8O)溶于1000ml蒸餾水中配成50TAE濃縮液，使用時(shí)用蒸餾

2、水稀釋50倍，即成工作液。6凝膠加樣緩沖液：O259溴酚藍(lán)、O259二甲苯青FF及409蔗糖溶于100ml蒸餾水中充分混勻溶解，于4℃冰箱中備用。瓊脂糖凝膠：29瓊脂糖溶于100m11TAE溶液中，微波爐加熱熔解，取出自然降溫至60℃左右時(shí)加入35u110mg／ml的溴乙錠溶液。10m∥ml的溴乙錠溶液：10mg溴乙錠溶于lml純水中即可。O01MPBS：Na2HPot‘12H201459，NaH2P042H20159，NaCL4259

3、，加蒸餾水定容至5000ml，NaoH調(diào)節(jié)PH至7274?？乖迯?fù)液：EDlAbuf№r用蒸餾水l：50稀釋。15主要儀器梯度PcR儀(美國(guó)BIoRAD公司)GENIus凝膠圖像分析儀(英國(guó)GENE公司)電泳圖像分析處理系統(tǒng)：BIoIMAGlNEsYsTEM(英國(guó))GS15R型低溫離心機(jī)(美國(guó)BEcKMAN公司)DYYIII5型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(北京六一儀器廠)wD一9403c型紫外投射反射儀(北京六一儀器廠)BH一2型光學(xué)顯微鏡(日本O

4、lympus公司)MN—K663s型燒烤微波爐(日本松下公司)YxQsG41280D型電熱手提式壓力蒸汽滅菌器(上海醫(yī)用核子儀器廠)OIympus攝像系統(tǒng)二、研究方法21cD34及EphB2免疫組織化學(xué)染色鄭州大學(xué)2006屆碩研究生畢業(yè)論文中英文摘要材料與方法應(yīng)用RT—PCR及免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2003年7月至2005年6月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)、臨床資料完整的48例肝癌組織、30例癌旁組織及l(fā)O例正常肝組織Eph

5、B2mRNA及蛋白表達(dá)情況；以CD34為微血管標(biāo)記物檢測(cè)各種組織標(biāo)本的微血管密度(MicrovesselDensity，MVD)，并將EphB2蛋白和微血管密度按表達(dá)強(qiáng)度各分為五個(gè)等級(jí)。分析EphB2蛋白在肝癌組織中的表達(dá)等級(jí)與相關(guān)臨床參數(shù)之間的關(guān)系，其中包括臨床分期、腫瘤分化程度、癌栓形成、肝外侵犯及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、肝硬化、船sAg、腫瘤數(shù)目、直徑、血清AFP水平等；并分析了EphB2蛋白表達(dá)與腫瘤微血管密度之間的關(guān)系。結(jié)果lEphB2mR

6、NA在各組肝臟組織中均有陽(yáng)性表達(dá)。其在肝癌組織(0915O350)中的表達(dá)明顯高于其相應(yīng)癌旁組織(01420123)及正常肝組織(O108O015)，但在癌旁組織和正常肝組織中的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(尸O，05)。2EphB2蛋白定位于肝細(xì)胞胞漿，在各組肝臟組織標(biāo)本中均有表達(dá)，其在肝癌組織周邊部位的表達(dá)最為明顯。48例肝癌組織中EphB2蛋白表達(dá)為：O級(jí)“O”例；1級(jí)“6”例：2級(jí)“l(fā)l”例；3級(jí)“13”例；4級(jí)“18”例；30例癌旁組織中

7、：O級(jí)“12”例；l級(jí)“9”例；2級(jí)“6”例；3級(jí)“2”例；4級(jí)“l(fā)”例；10例『F常肝組織中：0級(jí)“4”例；1級(jí)“3”例；2級(jí)“2”例；3級(jí)“1”例；4級(jí)“O”例。EphB2蛋自在肝癌中的表達(dá)明顯強(qiáng)于相應(yīng)癌旁組織及正常肝臟組織(尸005)；EphB2蛋白的表達(dá)在癌旁組織和正常肝組織之問(wèn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(胗O05)。3cD34主要定位于肝癌血竇內(nèi)皮細(xì)胞。48例肝癌組織中的MVD表達(dá)等級(jí)分別為：1級(jí)“7”例2級(jí)“13”例3級(jí)“16”例4級(jí)“1