天津市水體中主要病原生物分布規(guī)律研究 1 嗜肺軍團(tuán)菌分布規(guī)律及分子鑒定技術(shù)研究;2 引灤水源病原生物消長規(guī)律與控制對策研究.pdf

1、軍團(tuán)菌(legionella)是一種革蘭氏陰性桿菌，廣泛存在于自然環(huán)境和人工環(huán)境的水體、土壤中，可以通過含菌氣溶膠的方式在空氣中播散而被人體吸入導(dǎo)致人類感染，發(fā)生軍團(tuán)病。目前已發(fā)現(xiàn)作為軍團(tuán)菌肺炎(legionellapneumonia)病原體的軍團(tuán)菌屬有42個種、64個血清型，其中至少有19個種與人類疾病有關(guān)，與人類疾病關(guān)系最密切的為嗜肺軍團(tuán)菌種(legionellapniumophila)，已發(fā)現(xiàn)15個血清型。最近研究表明，在嚴(yán)重的社

2、會獲得性肺炎中，嗜肺軍團(tuán)菌為第二位病因，據(jù)統(tǒng)計軍團(tuán)病臨床病例中由嗜肺軍團(tuán)菌所引起的病例占軍團(tuán)菌病的80％以上。軍團(tuán)菌可以污染社區(qū)內(nèi)的水體，如自來水、空調(diào)系統(tǒng)冷卻塔水、水井飲用水、洗浴用水等。目前尚未見到對自然環(huán)境、生活環(huán)境等各主要水體進(jìn)行軍團(tuán)菌分布規(guī)律的系統(tǒng)研究。 隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高以及國家采取大力發(fā)展第三產(chǎn)業(yè)的政策，中高層建筑迅速增加并普遍采用中央空調(diào)。而中央空調(diào)及建筑物相對封閉的內(nèi)部環(huán)境都是引起軍團(tuán)病爆發(fā)的重

3、要因素，并嚴(yán)重危害建筑物內(nèi)人群身體健康。另外，環(huán)境中軍團(tuán)菌的廣泛存在也有可能造成其他水體如噴泉、分體空調(diào)冷凝水等的污染。因此，急需建立一種快速、準(zhǔn)確、簡便的檢驗方法并對各種水體中嗜肺軍團(tuán)菌的時間、空間分布進(jìn)行調(diào)查研究，為預(yù)防和控制軍團(tuán)菌傳播提供科學(xué)依據(jù)。 本研究對常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)方法的優(yōu)化、常規(guī)PCR方法的優(yōu)化、半套式PCR技術(shù)、簡并隨機(jī)引物擴(kuò)增DNA多態(tài)性、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性、微衛(wèi)星DNA多態(tài)性等分子鑒定技術(shù)在嗜肺軍團(tuán)菌鑒定及分型

4、上的應(yīng)用進(jìn)行了比較深入的研究，分析對比了以上幾種技術(shù)方法的優(yōu)缺點，并根據(jù)環(huán)境大規(guī)模調(diào)查方法要求操作簡便、費用較低、達(dá)到一定的敏感度和特異性的特點，選定用GVP培養(yǎng)基(加入萬古霉素和多粘菌素B)對水樣進(jìn)行初次接種培養(yǎng)，如有陽性菌落再分別轉(zhuǎn)種BCYE培養(yǎng)基培養(yǎng)。如在第2次培養(yǎng)陽性，挑取菌落進(jìn)行PCR鑒定和血清學(xué)鑒定這一系列方法作為本次軍團(tuán)菌調(diào)查研究的鑒定方法，其特點是最大程度地降低交叉污染的機(jī)率和假陽性率。 本研究以天津市城鄉(xiāng)各種水

5、體為研究對象進(jìn)行采樣檢測，以求得到軍團(tuán)菌分布的空間和時間特點，掌握其分布規(guī)律，為進(jìn)一步開展預(yù)防和控制軍團(tuán)菌病的措施研究打下基礎(chǔ)。 本研究在一年內(nèi)連續(xù)采樣，共設(shè)監(jiān)測點138個，采集了444份水樣，經(jīng)檢測其中軍團(tuán)菌陽性水樣28份，嗜肺軍團(tuán)菌陽性水樣25份，并對其中分離出的軍團(tuán)菌的種群進(jìn)行了分型鑒定研究。研究發(fā)現(xiàn)自然水體、空調(diào)冷卻水的監(jiān)測點軍團(tuán)菌檢出率分別為33.33％、27.78％；嗜肺軍團(tuán)菌陽性率分別達(dá)到28.6％和27.78％；

6、另外，尚有PCR鑒定陽性、血清學(xué)鑒定陰性水樣11份，PCR陰性、血清學(xué)鑒定陽性水樣2份。而且在加濕器、淋浴噴頭及人工噴泉等與人群生活密切相關(guān)水體中均有檢出，提示嗜肺軍團(tuán)菌分布廣泛，應(yīng)盡快采取預(yù)防與控制措施以保護(hù)人群身心健康。 1983年引灤入津作為天津市的飲用水源，改變了以前天津市一直以苦咸的海河水作為飲用水源的狀況。但隨著工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展和人民生活水平的提高，引灤河道沿岸的生產(chǎn)企業(yè)通過排污、倒虹閘的泄漏使生活污水和工業(yè)廢水進(jìn)入

7、河道內(nèi)，引灤河水質(zhì)也受到污染。如曾于1995年12月底至1996年1月19日發(fā)生寶坻縣境內(nèi)的窩頭河倒虹管的損壞、污水滲入明渠河道及1998年12月至1999年1月發(fā)生秦莊子泵站污水泄漏事故。 引灤入津二十年來對自爾王莊水庫至宜興埠泵站的26Km引灤河道定期進(jìn)行水質(zhì)常規(guī)檢驗的結(jié)果表明：生物污染較重(總大腸菌群達(dá)238000個/L)，超過《生活飲用水源水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》(CJ3020-93)一級水源水標(biāo)準(zhǔn)的要求。鑒于此，本研究根據(jù)引灤河道的

8、排污情況、河道的交叉情況及倒虹閘的分布情況確定采樣點。采集水樣以測定病原生物(包括細(xì)菌總數(shù)、總大腸菌群、糞大腸菌群、致病菌、f2噬菌體、隱孢子蟲)，并分析病原生物在河道各段的分布及變化規(guī)律，以便為制定引灤河水保護(hù)措施提供科學(xué)依據(jù)，所獲結(jié)果如下： 于橋水庫至爾王莊水庫段(明渠)的主要污染來源為沿途工業(yè)污水及生活污水的排污、澇水通過閘的泄漏。 從時間變化趨勢來看，細(xì)菌總數(shù)、總大腸菌群、糞大腸菌群、f2噬菌體在夏秋季較高，隱孢

9、子蟲除1～3月外，其他月份均有檢出。 從空間變化趨勢來看，從于橋水庫至爾王莊水庫段均有生物污染現(xiàn)象，在洇流大橋和九王莊閘下兩測點污染較嚴(yán)重。下游的爾王莊水庫和宜興埠泵站污染較輕。 總大腸菌群超過《生活飲用水水源水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》(CJ3020-1993)對一級水質(zhì)的要求，點次超標(biāo)率為47.6％，水質(zhì)較差。 提出了切實可行的控制措施，為政府部門制定引灤水源保護(hù)措施提供科學(xué)依據(jù)，有的建議已經(jīng)成為政府行為開始實施。預(yù)計這些建議