糖尿病大鼠門靜脈胰島細(xì)胞移植后CD62L、CD34表達(dá)的變化.pdf

1、目的： 1、探討STZ（鏈脲佐菌素）建立1型糖尿病大鼠模型的最適合劑量。 2、探討成年SD大鼠胰島細(xì)胞分離、純化以及胰島細(xì)胞質(zhì)量的鑒定方法；胰島細(xì)胞門靜脈移植前后外周血血糖、CD62L（LECAM-1，L-選擇素）以及胰島細(xì)胞移植（PIT）后肝組織內(nèi)CD62L、CD34的表達(dá)變化，探討PIT后排斥反應(yīng)發(fā)生的可能機(jī)制，為臨床應(yīng)用胰島細(xì)胞移植治療糖尿病提供實驗依據(jù)。 材料和方法： 1、建立糖尿病大鼠模型：將1

2、20只Wistar大鼠隨機(jī)分為五組，A組： NS組，NS腹腔內(nèi)注射；B組：檸檬酸緩沖液組，檸檬酸緩沖液腹腔內(nèi)注射；C組：鏈脲佐菌素（STZ）腹腔內(nèi)注射（55mg/Kg）；D組：STZ腹腔內(nèi)注射（65mg/Kg）；E組：STZ腹腔內(nèi)注射（75mg/Kg）。觀察注射后外周血血糖值、尿糖值、大鼠體重、飲水量及一般情況的變化，根據(jù)劉學(xué)政等[1]成模標(biāo)準(zhǔn)判斷五組的成模率。 2、①成年SD大鼠胰島細(xì)胞分離、純化和質(zhì)量鑒定：經(jīng)膽總管內(nèi)逆行灌注

3、膠原酶V的方法消化胰腺組織，F(xiàn)icoll400非連續(xù)密度梯度離心純化消化產(chǎn)物，獲得胰島細(xì)胞后雙硫腙（DTZ）染色、吖啶橙-碘丙啶（AO-PI）雙染色，結(jié)合糖刺激胰島素釋放試驗鑒定胰島細(xì)胞的純度、活率等。②門靜脈胰島細(xì)胞移植（PIT）后CD62L、CD34的表達(dá)變化：40只Wistar糖尿病大鼠隨機(jī)分為四組，A組：模型組，不做任何處理；B組：手術(shù)組，門靜脈移植達(dá)爾伯克(氏)必需基本培養(yǎng)液（DMEM液，0.8～1.0ml∕kg，含糖5.6m

4、mol/L），術(shù)前一天開始腹腔注射NS；C組：生理鹽水組，門靜脈移植已分離純化的胰島細(xì)胞，術(shù)前一天開始腹腔注射NS；D組：免疫抑制劑組，術(shù)前1天開始腹腔注射CsA（３mg／kg/d）+ MMF（20mg／kg/d）。其中C組、D組胰島細(xì)胞移植物來自SD大鼠，提取兩只正常SD大鼠胰島細(xì)胞供給一只Wistar大鼠糖尿病模型。以血糖儀檢測外周血血糖；單克隆抗體流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測外周血CD62L的表達(dá)；免疫組織化學(xué)SP法檢測肝組織CD62L、C

5、D34的表達(dá)。 結(jié)果： 1、A組、B組成模率為0，C組成模率為8.33％，D組和E組成模率為91.67％；成模率比較：A組與B組無顯著差異（P>0.05）, C組與D組、E組差異顯著（P<0.01），D組與E組無顯著差異（P>0.05）；D組和E組大鼠注射STZ后血糖值明顯增高、體重增加明顯減緩或不增加，一般情況較差，飲水量和大小便量明顯增加；A、B、C、D四組成模后2周內(nèi)死亡率均為零，E組大鼠死亡6只，達(dá)27.3％，且

6、感染率高達(dá)50％。 2、①大鼠胰腺經(jīng)消化、純化后獲得的胰島細(xì)胞數(shù)為430-690個胰島/胰腺，平均為520士70個胰島/胰腺，存活率在90％以上，純度為85％ 以上，胰島素釋放試驗顯示大鼠胰島細(xì)胞經(jīng)高糖刺激后胰島素分泌是低糖刺激分泌的2.7倍（P<0.05）。表明胰島細(xì)胞功能良好。②模型組和手術(shù)組比較：外周血血糖值、CD62L，肝組織內(nèi)CD62L，CD34的表達(dá)未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（P>0.05）；NS組和免疫抑制組比較：外周血血糖

7、值、CD62L，肝組織內(nèi)CD62L、CD34的表達(dá)有顯著性差異（P<0.01）。③NS組和免疫抑制組比較：不論是否使用免疫抑制劑，外周血血糖與外周血CD62L及外周血血糖與肝組織內(nèi)CD62L的表達(dá)變化呈正相關(guān)；外周血血糖與肝組織內(nèi)CD34的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。④ PIT后，免疫抑制劑組（D組）與未使用免疫抑制劑組（C組）比較：D組CD62L的表達(dá)相對較低，血糖控制較好，正常血糖時間維持較長，差異具有顯著性（P<0.01）。 結(jié)論：

8、 1、STZ是目前建立胰島素依賴型糖尿病大鼠模型的最適合藥物之一， 65mg/Kg的劑量具有成模率高、死亡率低、感染率低等優(yōu)點(diǎn)。 2、①經(jīng)膽總管逆行注入消化酶V，F(xiàn)icoll400不連續(xù)密度梯度離心是消化分離、純化胰島細(xì)胞有效的方法之一。②PIT后，NS組較免疫抑制劑組CD62L在外周血和肝組織內(nèi)表達(dá)顯著增高，血糖控制較差，提示機(jī)體可能通過抗體識別抗原（胰島細(xì)胞），CD62L表達(dá)增高，使分子與分子或分子與基質(zhì)之間黏附增強(qiáng)來參