糖尿病大鼠肺組織形態(tài)學(xué)改變及血管活性因子ET-1、CGRP、SP的表達(dá).pdf

1、目的：糖尿?。―iabetes Mellitus，DM）是冠心病的等危癥，除左心室外，DM患者亦存在右心室收縮和舒張功能異常。肺動(dòng)脈高壓是引起右心室功能異常的主要原因之一。DM患者在排除冠狀動(dòng)脈疾病、高血壓、心力衰竭或吸煙因素之后，肺動(dòng)脈高壓發(fā)生率仍明顯增加。內(nèi)皮素-1（endothelin-1，ET-1）、降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）及P物質(zhì)（substance P，SP

2、）是肺動(dòng)脈高壓病理過(guò)程中的關(guān)鍵因子。本研究通過(guò)短期高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合鏈脲佐菌素制備2型糖尿?。═ype2 Diabetes Mellitus，T2DM）大鼠模型，觀察糖尿病大鼠肺組織超微電鏡和光鏡下結(jié)構(gòu)，測(cè)量肺血管參數(shù)和ET-1、CGRP及SP的表達(dá)變化，探討DM肺動(dòng)脈高壓和右心病變的可能發(fā)病機(jī)制。 方法：3月鼠齡的成年雄性Wistar大鼠12只，隨機(jī)分為兩組：正常對(duì)照組（normal，N）（n=6）和DM組（n＝6）。N組給予普

3、通飼料，DM組給予高脂飼料。喂養(yǎng)8周后給予鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）30mg/kg體重尾靜脈一次注射制備DM模型，N組尾靜脈注射檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。72小時(shí)后測(cè)DM組大鼠血糖均大于16.65mmol/L，造模成功。成模后20周處死大鼠，留取肺組織：（1）2.5％戊二醛和1％四氧化鋨溶液進(jìn)行雙重固定后，以JEOL-100CX透射電鏡攝片并觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)變化；（2）10％中性福爾馬林固定：①HE染色光鏡下觀察

4、肺組織結(jié)構(gòu)變化；②進(jìn)行Weigert來(lái)復(fù)紅彈力纖維染色后運(yùn)用MIAS2000圖像分析系統(tǒng)測(cè)量與呼吸性細(xì)支氣管、肺泡管伴行的肺小動(dòng)脈管壁厚度占血管外徑百分比（ratio of vascular wall thickness/vascular external diameter，WT％）和管壁面積占血管總面積百分比（ratio of vascular wall area/total vaseular area，WA％），來(lái)評(píng)價(jià)DM大鼠肺動(dòng)脈

5、結(jié)構(gòu)變化；③用免疫組織化學(xué)方法定位肺組織ET-1、CGRP及SP的表達(dá)，然后運(yùn)用MIAS2000圖像分析系統(tǒng)測(cè)定平均光密度和陽(yáng)性表達(dá)面積/視場(chǎng)總面積以評(píng)價(jià)陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度。 結(jié)果：①DM組大鼠于造模后3天開始出現(xiàn)多飲多尿，體重不增加或明顯減輕，活動(dòng)減弱，一般狀態(tài)差。成模20周后殺檢時(shí)，DM組大鼠體重明顯低于N組（P<0.01）；血糖明顯高于N組（P<0.01）。②超微病理結(jié)構(gòu)：DM大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞微絨毛減少，嗜鋨板層小體少見，肺

6、間質(zhì)不清，氣血屏障基膜較明顯，內(nèi)皮細(xì)胞不明顯。③光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，N組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)正常，DM組與N組比較，肺泡腔縮小，肺泡隔增厚，肺泡數(shù)量增多。肺泡隔面積與總視場(chǎng)面積比增加（P<0.01）。④Weigert來(lái)復(fù)紅彈力纖維染色顯示DM組大鼠肺動(dòng)脈壁增厚，血管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。DM組與N組比較，肺動(dòng)脈WT％和WA％均增加（均P>0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑤免疫組織化學(xué)顯示N組和DM組肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)

7、胞、氣道和血管平滑肌細(xì)胞、肺神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞可見ET-1陽(yáng)性表達(dá)；肺泡上皮細(xì)胞、各級(jí)支氣管粘膜上皮的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和血管平滑肌層可見CGRP陽(yáng)性表達(dá)；肺神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞可見SP陽(yáng)性表達(dá)。DM組與N組比較，ET-1平均光密度增加（P<0.05），ET-1表達(dá)陽(yáng)性面積/視場(chǎng)總面積增加（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SP平均光密度增加（P<0.05），SP表達(dá)陽(yáng)性面積/視場(chǎng)總面積增加（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義；CGRP平均光密度增加（P>0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CGRP表達(dá)陽(yáng)性面積/視場(chǎng)總面積增加（P>0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：①高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素尾靜脈一次性注射可成功制備T2DM大鼠模型。②DM肺組織超微病理示肺泡上皮細(xì)胞受損；光鏡示肺泡隔增厚，肺泡腔縮小，肺泡數(shù)量增多，提示肺組織可能存在缺氧。③DM組大鼠與呼吸性細(xì)支氣管及肺泡管伴行的肺動(dòng)脈WT％和WA％有增加趨勢(shì)，提示肺動(dòng)脈結(jié)構(gòu)改變可能是糖