氨基熒光探針檢測用于制作人工心臟瓣膜的牛心包交聯(lián)程度的研究.pdf

1、研究目的
　　生物材料廣泛應用于心血管外科領域，如:應用生物材料豬主動脈瓣、牛心包、牛頸靜脈等制作心臟生物瓣膜，帶瓣血管、補片等，應用前都經過交聯(lián)改性處理。交聯(lián)改性處理的關鍵步驟是使生物材料內部蛋白質分子的氨基或羧基末端之間發(fā)生交聯(lián)反應，交聯(lián)反應的程度直接決定了生物材料處理的效果，因此，交聯(lián)度檢測成為判斷組織品質的重要檢測方法之一。目前只有間接檢測方法，且現(xiàn)行方法陳舊，不能準確有效的說明交聯(lián)反應程度，本實驗利用羧基熒光素琥珀酰亞胺

2、酯能與氨基基團發(fā)生特異性不可逆結合，且在波長為488nm的激發(fā)光下發(fā)出綠色熒光這一特性，建立一種檢測生物瓣膜交聯(lián)效果的新技術—氨基熒光探針法，它能量化未經交聯(lián)處理的氨基數量，從而反應生物瓣膜交聯(lián)程度。
　　研究方法
　　以0.5％濃度戊二醛交聯(lián)的經脫細胞處理的牛心包為研究對象，按其與戊二醛作用時間不同分組，未經戊二醛處理的牛心包為對照組（A組），0.5％戊二醛處理組分為:10分鐘組（B組），30分鐘組（C組），6小時組（D組

3、）。各組反應后洗脫戊二醛，將牛心包作快速冰凍切片，在避光條件下與羧基熒光素琥珀酰亞胺酯反應2小時后于熒光顯微鏡下觀察各組熒光強度并拍照，用特殊的熒光分析軟件分析每張圖片的熒光強度，作統(tǒng)計學處理，比較各組平均熒光強度差異。同時對各組牛心包組織提蛋白行聚丙烯酰胺凝膠電泳，比較新方法與傳統(tǒng)方法檢測牛心包交聯(lián)程度的差異。
　　結果
　　熒光顯微鏡下可見隨交聯(lián)時間增加綠色熒光越弱，熒光強度對照組(A組)＞10分鐘組（B組）＞30分鐘組