銀屑病患者CD8+T細(xì)胞的表型鑒定及其作用研究.pdf

1、銀屑?。≒soriasis）是一種具有多基因遺傳背景的慢性炎癥性皮膚病，目前，銀屑病的病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚，也缺乏滿意的針對(duì)性治療方法，該疾病常反復(fù)發(fā)作，難以根治，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量。近年研究發(fā)現(xiàn)，自身免疫紊亂、角質(zhì)形成細(xì)胞生物學(xué)行為異常等在銀屑病發(fā)病中均發(fā)揮著一定的作用。其中，T細(xì)胞在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中起到至關(guān)重要的作用，其異?；罨倾y屑病發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。
　　目的:
　　觀察銀屑病患者皮損和外周血中CD8+T細(xì)胞

2、亞群的比例，并探討不同亞群在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:
　　收集10例銀屑病患者皮損、8例扁平苔蘚患者皮損及10例健康對(duì)照組皮膚，采用免疫組化技術(shù)和免疫熒光技術(shù)觀察CD8α、CD8β、顆粒酶B（GranzymeB）、穿孔素（Perforin）及CD107a的表達(dá)分布；同時(shí)收集40例銀屑病患者、20例扁平苔蘚患者及40例健康對(duì)照組外周血，采用流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry，F(xiàn)CM）分別檢測(cè)CD8α+α+T細(xì)

3、胞和CD8α+β+T細(xì)胞比例，并觀察CD8α+α+T細(xì)胞和CD8α+β+T細(xì)胞亞群分泌干擾素γ（Interferon-γ，IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、顆粒酶B及穿孔素的水平。采用Graph pad Prism統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)分析。
　　結(jié)果:
　　首先，免疫組化和免疫熒光結(jié)果顯示銀屑病患者皮損表皮和真皮淺層有CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)，且以CD8

4、α+α+T細(xì)胞亞群為主，而健康對(duì)照組皮膚中未見(jiàn)CD8α和CD8β的表達(dá)。其次，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，健康對(duì)照組外周血中CD8α+α+T細(xì)胞比例為12.26％±2.35%，CD8α+β+T細(xì)胞的比例為82.74%±2.35%；銀屑病外周血中CD8α+α+T細(xì)胞比例為29.48%±3.20%，CD8α+β+T細(xì)胞的比例為67.10%±3.77%。銀屑病患者外周血中CD8α+α+T細(xì)胞比例明顯高于健康對(duì)照組，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=3.08，P＜0.

5、01），而銀屑病患者外周血中 CD8α+β+ T細(xì)胞比例較健康對(duì)照組相比明顯下降，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=3.52，P＜0.01）。此外，在銀屑病患者外周血CD8α+α+T細(xì)胞中分泌 IFN-γ和TNF-α的細(xì)胞比例分別為45.67%±6.83%和54.14%±6.69%，CD8α+β+T細(xì)胞中分泌IFN-γ和TNF-α的細(xì)胞比例分別為26.25%±4.25%和23.56%±4.72%；健康對(duì)照組外周血CD8α+α+ T細(xì)胞中分泌IFN-

6、γ和TNF-α的細(xì)胞比例分別為13.44%±3.26%和34.03%±6.09%，CD8α+β+T細(xì)胞中分泌IFN-γ和TNF-α的細(xì)胞比例分別為5.69%±1.40%和13.45%±2.25%。銀屑病患者和健康對(duì)照外周血中CD8α+α+T細(xì)胞表達(dá)IFN-γ和TNF-α的比例均高于CD8α+β+T細(xì)胞，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（銀屑病患者組t值分別為2.41和3.74，P值分別＜0.05和＜0.01；健康對(duì)照組t值分別為2.19和3.1，P值均＜

7、0.05）。銀屑病患者CD8α+α+T細(xì)胞和CD8α+β+ T細(xì)胞中表達(dá)IFN-γ和TNF-α的比例均明顯高于健康對(duì)照組。再次，在銀屑病患者皮損和扁平苔蘚患者皮損中均可見(jiàn)CD8α和顆粒酶B、CD8α和穿孔素的共表達(dá)，而在健康對(duì)照組皮膚中均未見(jiàn)CD8α和顆粒酶B、CD8α和穿孔素的共表達(dá)；在銀屑病患者、扁平苔蘚患者和健康對(duì)照組外周血CD8α+α+ T細(xì)胞中顆粒酶B的表達(dá)均明顯高于CD8α+β+ T細(xì)胞，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為3.57、

8、3.16和2.77；P值分別＜0.01、＜0.01和＜0.05）；銀屑病患者外周血CD8α+α+T細(xì)胞中顆粒酶B的表達(dá)水平明顯高于扁平苔蘚患者組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值為2.88；P值＜0.05）；余兩兩間無(wú)明顯差異。穿孔素的表達(dá)在銀屑病患者外周血 CD8α+β+ T細(xì)胞中明顯高于健康對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值為2.17，P值＜0.05）；而銀屑病患者及扁平苔蘚患者外周血CD8α+α+ T細(xì)胞中穿孔素表達(dá)較CD8α+β+ T細(xì)胞有一定升

9、高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，考慮和樣本量較少有關(guān)。最后，在扁平苔蘚患者皮損真皮淺層均可見(jiàn)CD107a表達(dá)，但是CD107a與CD8α僅有個(gè)別共表達(dá)；而在銀屑病患者皮損和健康對(duì)照組皮膚全層均未見(jiàn)CD107a表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　CD8+T細(xì)胞參與銀屑病的發(fā)病過(guò)程，其中CD8α+α+T細(xì)胞可能是參與銀屑病炎癥反應(yīng)的主要CD8+T細(xì)胞亞群，并主要通過(guò)分泌IFN-γ和TNF-α等相關(guān)細(xì)胞因子發(fā)揮作用。銀屑病患者CD8+T細(xì)胞均不同程度地表