夏橙綠斑病發(fā)生、危害和病原遺傳多樣性研究.pdf

1、本文對夏橙綠斑病的發(fā)生、危害、防治以及病原遺傳多樣性等進行了系統(tǒng)研究和探討，為重慶三峽庫區(qū)夏橙產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，為夏橙產(chǎn)量的提高、果實品質(zhì)的改善等提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下： 1、夏橙綠斑病病原、生物學(xué)特性和發(fā)病規(guī)律研究。對重慶夏橙基地發(fā)生的夏橙綠斑病癥狀和病原藻形態(tài)進行了觀察，行進行了病原藻分離、致病性測定、生長特性和發(fā)病規(guī)律研究。結(jié)果表明，該病是由綠藻門虛幻球藻屬虛幻球藻(Apatococcuslobatus)寄生所致；病藻

2、適應(yīng)溫度范圍比較廣，5～30℃都可生長，15～25℃為其適溫范圍；病藻具有廣泛的光適應(yīng)性，在500～4000lx的光照范圍內(nèi)均可生長，1000～3000lx為其適宜的光照范圍；在pH值為4～10時病藻均能生長，適宜生長的pH值為5～9。該病原藻以孢子體形態(tài)在夏橙樹體各個器官以及夏橙園周圍其它樹體上越夏、越冬，當(dāng)環(huán)境條件適宜時，孢子體進行無性繁殖，借風(fēng)、雨、昆蟲等傳播，寄主廣，寄生部位多，在重慶地區(qū)每年3～5月和9～11月為田間發(fā)病盛期。

3、此外，該病的發(fā)生還與空氣濕度密切相關(guān)，當(dāng)空氣濕度大于80﹪時，發(fā)病就嚴(yán)重。 2、夏橙葉片感染綠斑病后的解剖學(xué)和超微結(jié)構(gòu)研究。以感染綠斑病后的夏橙葉片為試材，對其解剖學(xué)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)進行研究。結(jié)果表明，綠斑病病原體主要分布在葉片上表面，少量的分布在葉片下表面；病葉總厚度變薄，柵欄組織內(nèi)存在空洞，細(xì)胞壁不明顯，細(xì)胞扭曲嚴(yán)重，其細(xì)胞內(nèi)葉綠體的細(xì)胞數(shù)目較少；病葉海綿組織細(xì)胞呈團狀分布，團狀細(xì)胞緊密排列，每一團狀之間相隔間距較大；病葉葉脈

4、維管束韌皮纖維較健康葉片的少，且木質(zhì)化程度不高。電鏡觀察表明，感病夏橙葉片的柵欄組織細(xì)胞腫脹，細(xì)胞膜增生，出現(xiàn)泡狀物和晶體，細(xì)胞壁斷裂，胞質(zhì)溶解，線粒體增多，細(xì)胞核變形，葉綠體膨脹，基粒片層結(jié)構(gòu)模糊。 3、夏橙綠斑病對夏橙葉片生理生化的影響。以盆栽的2年生奧靈達夏橙為試材，研究了夏橙綠斑病對夏橙葉片生理生化的影響。結(jié)果表明：(1)輕度病葉(感病程度為5﹪)凈光合速率(Pn)、氣孔導(dǎo)度(Gs)、蒸騰速率(Tr)和胞間CO2濃度(C

5、i)的日變化與健葉相似，Pn和Gs的日變化呈雙峰型曲線，Tr日變化呈單峰型曲線，Ci在午前直線下降，午后維持一段時間的較低水平，而后逐漸回升，光合作用有明顯的“午休”現(xiàn)象，主要受氣孔因數(shù)控制；中度病葉(感病程度為40﹪)和重度病葉(感病程度為80﹪)的光合日變化與健葉明顯不同，Pn、Gs和Tr的日變化曲線整體大幅度下降，變幅和峰值均小，而Ci在午前下降緩慢，午后一直保持較高水平，光合作用主要受非氣孔因數(shù)控制。(2)輕度病葉對葉綠素總量(

6、Chla+b)、類胡蘿卜素含量(Car)、凈光合速率(Pn)、胞間CO2濃度(Ci)、原初光能轉(zhuǎn)換效率(Fv/Fm)、光合電子傳遞量子效率(ψPSⅡ)和光化學(xué)猝滅系數(shù)(qP)無顯著影響；中度病葉和重度病葉的Chla+b、Car、Pn、Fv/Fm、ψPSⅡ和qP較對照分別下降了23.85﹪、26.49﹪、43.3﹪、4.5﹪、35.1﹪、22.5﹪和37.61﹪、44.04﹪、64.5﹪、8.6﹪、63.6﹪、40.1﹪，與對照差異顯著，

7、而Ci較對照顯著上升。因此，綠斑病藻的大量寄生對夏橙葉片光合作用造成了傷害，而凈光合速率的下降主要是由非氣孔因素限制引起。(3)輕度病葉對葉片氮代謝無顯著影響；中度病葉和重度病葉的含氮量、總氨基酸含量和硝酸還原酶活性較對照分別下降了14.9﹪、10.2﹪、28.7﹪和35.1﹪、24.7﹪、72.5﹪.而游離脯氨酸含量和可溶性蛋白含量較對照分別增加了50.6﹪、28.0﹪和115.7﹪、86.9﹪，與對照差異顯著，這些變化體現(xiàn)了夏橙對病

8、原藻寄生的適應(yīng)性反應(yīng)。(4)輕度病葉對葉片膜脂過氧化無顯著影響，中度病葉和重度病葉顯著增加了葉片中MDA、H202、02含量和膜透性，降低了葉片中CAT、SOD和POD含量，表明綠斑病藻大量寄生后夏橙葉片中細(xì)胞活性氧清除系統(tǒng)的功能降低，可能是導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧積累，進而引起膜脂過氧化發(fā)生和膜系統(tǒng)受損的重要原因。 4、夏橙綠斑病對夏橙果實品質(zhì)的影響。以20年生奧靈達夏橙和伏令夏橙為試材，研究了夏橙綠斑病對夏橙果實品質(zhì)的影響。試驗結(jié)果

9、表明，與健果相比，病藻寄生果實后對果實的大小、果形指數(shù)無顯著影響；感病程度為40﹪和80﹪的夏橙果實明顯降低了果皮中類胡蘿卜素、花青素總量、類胡蘿卜素/葉綠素的比值、花青素/葉綠素的比值和果皮亮度、黃色度和紅色度，增加了果皮中葉綠素含量，抑制了果實著色，增加了果面污斑，降低了果實的外觀品質(zhì)。與健果相比，病藻寄生果實后對果實可滴定酸無顯著影響，降低了果實中氨基酸總量和必需氨基酸總量，降低了果實中Ca、Mg、Cu、Zn、Fe和Mn含量，增加

10、了果實中K的含量；當(dāng)感病程度為80﹪的夏橙果實顯著降低了果實可食率、出汁率、可溶性固形物、總糖、維生素C和蛋白質(zhì)含量，影響了果實的內(nèi)在品質(zhì)。試驗結(jié)果說明病藻大量寄生明顯降低了夏橙果實的品質(zhì)和商品性。 5、夏橙綠斑病調(diào)控初探。2004年選用了13種藥劑對夏橙綠斑病藻進行了室內(nèi)毒力測定。結(jié)果表明，50﹪新靈WP、62.25﹪仙生WP和80﹪大生M-45WP對病藻生長的抑制效果較好，EC50分別是2.3531、2.6234和3.414

11、6mg/kg；其次為10﹪世高WG、40﹪炭克WP和25﹪炭特靈WP，其EC50分別為9.3815、10.3739和13.8816mg/kg；而銅制劑對虛幻球藻的毒力較低，57.6﹪冠菌清GR、53.8﹪可殺得DF、20﹪天地銅EC和77﹪冠菌銅WP的EC50分別為24.4039、28.9808、39.6552和40.2661mg/kg；12﹪睛菌唑EC、50﹪甲霜靈WP和50﹪多菌靈WP的毒力較弱，EC50分別是54.9263、69.

12、0240和324.5114mg/kg。 2005年在室內(nèi)毒力測定基礎(chǔ)上選用了5種藥劑對夏橙綠斑病藻進行了田間小區(qū)試驗。結(jié)果表明，50﹪新靈WP600倍和62.25﹪仙生WP600倍液的防效較好，其次為10﹪世高WG1000倍和53.8﹪可殺得DF1000倍液，而25﹪炭特靈WP600倍液的防治效果較低，經(jīng)方差分析，處理間存在顯著差異。2004～2005年以20年生奧靈達夏橙為試材，研究了不同時期的果實套袋處理對綠斑病發(fā)生和果實品

13、質(zhì)的影響。結(jié)果表明，套袋能有效控制果實綠斑病的發(fā)生，可提高果實亮度、黃色度和紅色度，明顯改善果實的外觀品質(zhì)，但單果重有輕微減少；套袋果的可溶性固形物、總糖和可滴定酸含量較對照有所降低，套袋越早，降低越多；套袋各處理果實的維生素C含量均比對照有所增加。綜合分析表明，夏橙在9月至10月套雙層紙袋對控制果實綠斑病、改善果實品質(zhì)較好。 6.夏橙綠斑病原藻分離株的遺傳多樣性。對分離自夏橙綠斑病的4株虛幻球藻分離株進行表型特性研究，并從10

14、0個ISSR隨機引物中篩選出條帶比較清晰、主帶明顯、重復(fù)性好的9個ISSR引物，對4株虛幻球藻分離株進行ISSR分析，再用UPGMA法聚類分析。結(jié)果表明，這4株虛幻球藻分離株表型存在差異；9個引物共擴增出條帶98條，其中多態(tài)性條帶數(shù)為57，多態(tài)性比率為58.2﹪；長壽株虛幻球藻與江安株虛幻球藻的遺傳距離為0.1852，距離較近，遺傳相似性較大，而它們與另兩株的遺傳距離及另兩株之間的遺傳距離均較遠，遺傳相似性較小，說明4株虛幻球藻分離株基