益骨顆粒治療骨質(zhì)疏松的藥效及機(jī)理研究.pdf

1、第一部分鎮(zhèn)痛、抗炎作用
　　 目的：觀察益骨顆粒的鎮(zhèn)痛、抗炎作用。
　　 方法：鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為5組。(I)空白對(duì)照組：蒸餾水；(2)益骨顆粒低劑量組：8g生藥/kg；(3)益骨顆粒中劑量組：16g生藥/kg；(4)益骨顆粒高劑量組：32g生藥/kg；(5)骨松寶組：2g/kg。各組均灌胃給藥1次，給藥體積為0.2ml/10g。采用熱板法和醋酸扭體法觀察益骨顆粒的鎮(zhèn)痛作用?？寡鬃饔貌捎萌N方法--對(duì)腹腔注射醋酸所致小

2、鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響、對(duì)巴豆油混合致炎劑所致小鼠耳廓腫脹的影響、對(duì)大鼠塑料環(huán)肉芽腫影響試驗(yàn)。前兩個(gè)抗炎實(shí)驗(yàn)和鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)一樣分組給藥，第三個(gè)實(shí)驗(yàn)的大鼠隨機(jī)分為5組。(1)空白對(duì)照組：蒸餾水；(2)益骨顆粒低劑量組：4g生藥/kg；(3)益骨顆粒中劑量組：8g生藥/kg；(4)益骨顆粒高劑量組：16g生藥/kg；(5)骨松寶組：1g/kg。造模后第10天開(kāi)始灌胃給藥，給藥體積為1ml/100g，每天1次，連續(xù)給藥14天。
　　

3、 結(jié)果：益骨顆粒各劑量組在給藥后各時(shí)間點(diǎn)痛閾值均高于空白對(duì)照組，尤其在給藥后1h鎮(zhèn)痛效果最明顯。益骨顆粒中、高劑量組能明顯減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，與空白對(duì)照組比較，有顯著性差異(P<0.05，0.01)。益骨顆粒能抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增高(P<0.05，0.01)。益骨顆粒各個(gè)劑量組均能減輕小鼠耳廓腫脹度，與空白對(duì)照組相比，有顯著性差異(P<0.05，0.01)。益骨顆粒各個(gè)劑量組肉芽腫凈重，與空白對(duì)照組相比，均

4、有顯著性差異(P<0.05，0.01)。
　　 結(jié)論：益骨顆粒有一定的鎮(zhèn)痛、抗炎作用。
　　 第二部分益骨顆粒對(duì)小鼠腸系膜微循環(huán)的影響
　　 目的：觀察益骨顆粒對(duì)小鼠腸系膜微循環(huán)的影響。
　　 方法：昆明種小鼠隨機(jī)分為5組。(1)空白對(duì)照組：蒸餾水；(2)骨松寶組(GSB)：2g/kg；(3)益骨顆粒低劑量組(BBG-L):8g生藥/kg；(4)益骨顆粒中劑量組(BBG-M):16g生藥/kg；(5)益骨

5、顆粒高劑量組(BBG-H):32g生藥/kg。各組均灌胃，給藥體積12ml/kg，連續(xù)給藥3天。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12小時(shí)，灌胃給藥后，戊巴比妥鈉40mg/kg，腹腔注射麻醉，背位固定，右下腹部剪毛，剪開(kāi)約3cm切口，拉出一段腸袢，平鋪于有機(jī)玻璃灌流小池上，大頭針固定，30℃緩慢灌流，放大鏡放大20倍觀察微血管，固定視野，并用高壓汞燈作為冷光源。分離股靜脈供給藥用，靜脈注射10％高分子右旋糖酐6ml/kg，10分鐘和30分鐘分別觀察并計(jì)錄

6、微循環(huán)障礙指標(biāo)。觀察固定區(qū)域內(nèi)固定面積毛細(xì)血管與四周邊界的交叉點(diǎn)數(shù)目、血流速度、毛細(xì)血管血流狀態(tài)。
　　 結(jié)果：益骨顆粒三個(gè)劑量組毛細(xì)血管網(wǎng)交叉點(diǎn)數(shù)均增加；血液速度增快，與空白對(duì)照組相比，均有顯著性差異(P<0.05)；血流狀態(tài)積分下降。
　　 結(jié)論：益骨顆粒有促進(jìn)毛細(xì)血管開(kāi)放作用，可以明顯增加毛細(xì)血管血流速度和改善毛細(xì)血管內(nèi)血流狀態(tài)。
　　 第三部分益骨顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性骨質(zhì)疏松大鼠模型的影響
　　 目的：觀

7、察益骨顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性骨質(zhì)疏松的影響。
　　 方法：雌性24周齡SD大鼠90只，隨機(jī)分為6組。其中空白對(duì)照組大鼠不作處理，其余大鼠以3％戊巴比妥鈉溶液1ml/kg的劑量腹腔注射麻醉，由背側(cè)入，完整摘除雙側(cè)卵巢，止血縫合?？瞻讓?duì)照組只切除少量脂肪組織。術(shù)后肌注青霉素生理鹽水2萬(wàn)u/kg，連用3天。飼養(yǎng)一周后，將去卵巢大鼠隨機(jī)分為5組，加上空白對(duì)照組總共6組：(1)空白對(duì)照組：給予等量的蒸餾水；(2)模型組：給予等量的蒸餾水；(3)益骨

8、顆粒低劑量組(BBG-L):給予益骨顆粒4g生藥/kg；(4)益骨顆粒中劑量組(BBG-M)：給予益骨顆粒8g生藥/kg；(5)益骨顆粒高劑量組(BBG-H):給予益骨顆粒16g生藥/kg；(6)陽(yáng)性對(duì)照組(CEE3):尼爾雌醇片以蒸餾水溶解后，灌胃給藥1mg/kg。除陽(yáng)性對(duì)照組每周灌胃一次，其余各組均每天灌胃一次(1ml/100g)。灌胃3個(gè)月后測(cè)定股骨骨密度(BMD)、血液生化指標(biāo)、尿生化指標(biāo)、降鈣素(CT)、骨鈣素(BGP)及雌二

9、醇(E2)含量，并進(jìn)行大鼠股骨干骺端松質(zhì)骨掃描電鏡觀察。
　　 結(jié)果：模型組股骨骨密度顯著低于空白對(duì)照組(P<0.01)。益骨顆粒低、中、高劑量組骨密度值與模型組相比較有所提高，其中益骨顆粒中、高劑量組具有顯著差異(P<0.05，0.01)。模型組血鈣、血磷含量顯著低于空白對(duì)照組(P<0.05)，堿性磷酸酶、羥脯氨酸含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.01)。益骨顆粒低、中、高劑量組血鈣含量與模型組相比增加，堿性磷酸酶含量與模型組比

10、較有所降低，其中中、高劑量組具有顯著差異(P<0.05，0.01)。益骨顆粒低、中、高劑量組血磷含量與模型組相比增加，羥脯氨酸含量與模型組相比降低，其中高劑量組具有顯著差異(P<0.05)。模型組尿鈣、尿磷含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)。益骨顆粒低、中、高劑量組尿鈣、尿磷含量與模型組相比有所降低，其中高劑量組具有顯著差異(P<0.05，0.01)。模型組降鈣素(CY)及雌二醇(E2)含量顯著低于空白對(duì)照組(P<0.01)。益骨顆

11、粒低、中、高劑量組含量與模型組相比增加，其中降鈣素(CT)含量中、高劑量組與模型組具有顯著差異(P<0.05，0.01)，雌二醇(E2)含量低、中、高劑量組與模型組具有顯著差異(P<0.01)。模型組骨鈣素(BGP)含量與空白對(duì)照組比較無(wú)差異。益骨顆粒低、中、高劑量組骨鈣素(BGP)含量與模型組相比也無(wú)顯著差異。模型組骨小梁排列稀疏，直徑變細(xì)，骨髓腔較空曠。而益骨顆粒中、高劑量組對(duì)此有所改善。
　　 結(jié)論：益骨顆粒能夠增加去卵巢

12、大鼠的骨密度，改善松骨質(zhì)微結(jié)構(gòu)。益骨顆粒低、中、高劑量組堿性磷酸酶和骨鈣素的含量低于模型組，能降低摘除卵巢后雌激素急劇下降所致的高骨轉(zhuǎn)換率，有效延緩骨質(zhì)疏松的發(fā)生。
　　 第四部分益骨顆粒對(duì)成骨細(xì)胞的影響
　　 目的：運(yùn)用中藥血清藥理學(xué)方法，觀察益骨顆粒含藥血清對(duì)新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞(OB)體外增殖的影響及對(duì)成骨細(xì)胞分泌IL-6和TNF-α的影響。
　　 方法：雌性12月齡SD大鼠80只，隨機(jī)分為生理鹽水組、益骨

13、顆粒低劑量(8g生藥/kg)、中劑量(16g生藥/kg)、高劑量(64g生藥/kg)組，每日灌胃一次，連續(xù)12天，分別在灌胃后的1h、1.5h、2h采血，分離血清，用含不同濃度益骨顆粒的血清培養(yǎng)SD新生大鼠顱骨OB，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。將SD大鼠30只，隨機(jī)分為3組(空白組、益骨顆粒組和尼爾雌醇組)，每組10只，益骨顆粒(BBG)組按64g生藥/kg灌胃給藥，尼爾雌醇(CEE3)組按1mg/kg(尼爾雌醇片以蒸餾水溶解)灌胃給藥，

14、空白組給予同等體積的生理鹽水。每日灌胃1次，連續(xù)12天，末次給藥前禁食12 h，自由飲水，在末次給藥后1.5 h乙醚麻醉，眼眶取血，3000r/min離心10 min，取上清。體外分離、培養(yǎng)成骨細(xì)胞，采用酶聯(lián)免疫吸附法，檢測(cè)成骨細(xì)胞IL-6和TNF-α的水平。
　　 結(jié)果：末次灌胃后1.5 h采血組的吸收度(A)值明顯高于各組其它時(shí)間(P<0.05)，不同劑量各濃度的益骨顆粒含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的OB增殖均有顯著的促進(jìn)作用，其中以