艾灸“大腸俞”對(duì)大鼠背根神經(jīng)節(jié)P2X7受體介導(dǎo)內(nèi)臟痛敏的作用研究.pdf

1、研究背景與目的:
　　腸功能紊亂性疾病(如腸易激綜合征)和炎性反應(yīng)性腸病常出現(xiàn)內(nèi)臟敏感性增高,而內(nèi)臟痛敏是引發(fā)內(nèi)臟痛的最主要病理機(jī)制。功能性腸病腸壁與炎性反應(yīng)性腸病相似也存在炎性反應(yīng),腸壁慢性炎性剌激產(chǎn)生內(nèi)臟傷害性反應(yīng),傷害性信號(hào)引發(fā)內(nèi)臟痛。三磷酸腺苷(ATP)及其作用的 P2X7受體在痛覺(jué)傷害性信息傳遞中具有重要作用。外周感受器感受傷害性刺激后形成傷害性沖動(dòng)是通過(guò)背根神經(jīng)節(jié)(DRG)初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)傳入。艾灸可能具有抗炎免疫調(diào)節(jié)作用

2、。熱敏灸是施灸熱敏腧穴治療時(shí)通過(guò)產(chǎn)生透熱、擴(kuò)熱、傳熱、局部不熱遠(yuǎn)部熱等現(xiàn)象的一種懸灸治療方法。臨床研究顯示熱敏懸灸可較好治療腸易激綜合征,但其作用機(jī)制尚不清楚。本研究以新生乳鼠結(jié)直腸擴(kuò)張(colorectal distension, CRD)制備腸易激綜合征內(nèi)臟痛敏模型,懸灸大鼠熱敏腧穴“大腸俞”40 min模擬熱敏灸,觀察艾灸鎮(zhèn)痛效應(yīng)是否與腸壁慢性炎癥剌激后背根神經(jīng)節(jié)P2X7受體表達(dá)變化有關(guān)。
　　方法:
　　(1)以新生

3、乳鼠結(jié)直腸擴(kuò)張制備腸易激綜合征內(nèi)臟痛敏模型,懸灸大鼠熱敏腧穴“大腸俞”40 min模擬熱敏灸治療;(2)檢測(cè)對(duì)照組,模型組,艾灸非穴位組和艾灸穴位組大鼠腹壁撤退反射評(píng)分(abdominal withdrawal reflex, AWR)評(píng)分和內(nèi)臟痛敏閾值(3)免疫熒光雙標(biāo)法觀察衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)與 P2X7受體的共表達(dá)情況。(4)RT-PCR觀察各組背根神經(jīng)節(jié) P2X7受體mRNA表達(dá)的變化。(5)免疫組織化

4、學(xué)和Western Blot方法檢測(cè)各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)P2X7受體蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1、新生乳鼠直結(jié)腸球囊擴(kuò)張刺激8周建模后檢測(cè)結(jié)果表明:模型組CRD痛敏閾值較對(duì)照組痛敏閾值明顯降低,模型組在20、40、60、80 mmHg各級(jí)CRD的AWR評(píng)分較對(duì)照組明顯增高(p<0.01)。結(jié)果表明新生乳鼠CRD連續(xù)刺激可形成內(nèi)臟痛敏模型。
　　2、穴位艾灸組大鼠痛閾值較模型組大鼠增加(p<0.01),非穴位艾灸組大

5、鼠痛閾值與模型組比較無(wú)差異(p>0.05)。穴位艾灸組在20、40、60、80 mmHg各級(jí)CRD的AWR評(píng)分均較模型組明顯降低(p<0.01),非穴位艾灸組與模型組比較無(wú)差異(p>0.05)。
　　3、免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示:模型組DRG中P2X7受體免疫反應(yīng)性水平較對(duì)照組明顯增加(p<0.01),艾灸“大腸俞”穴位組較模型組P2X7受體表達(dá)水平顯著下降(p<0.01),艾灸非穴位組與模型組之間無(wú)差異(p>0.05)。
　　

6、4、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)結(jié)果顯示:模型組DRG中P2X7 mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增加(p<0.01),艾灸“大腸俞”穴位組較模型組P2X7 mRNA表達(dá)水平顯著下降(p<0.01),艾灸非穴位組與模型組之間無(wú)差異(p>0.05)。
　　5、免疫熒光雙標(biāo)檢測(cè)顯示:背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X7受體和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)共表達(dá),模型組 P2X7受體和 GFAP的表達(dá)較對(duì)照組明顯增加,而艾灸“大腸俞”穴位組與

7、模型組相比其P2X7受體和GFAP的表達(dá)顯著降低,艾灸非穴位組與模型組之間無(wú)差異。
　　6、蛋白印跡結(jié)果顯示:模型組背根神經(jīng)節(jié)P2X7受體蛋白的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增加,而穴位艾灸“大腸俞”組與模型組相比其P2X7受體蛋白的表達(dá)水平顯著降低(p<0.01),非穴位艾灸組與模型組之間無(wú)差異(p>0.05)。
　　結(jié)論:
　　熱敏灸大腸俞穴通過(guò)抑制內(nèi)臟痛導(dǎo)致的背根神經(jīng)節(jié)P2X7受體mRNA和蛋白表達(dá)水平的上調(diào),降低背根神經(jīng)