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1、目的:在原代培養(yǎng)大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的基礎(chǔ)上,將不同劑量阿霉素作用于DRG細(xì)胞,觀察其作用并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。 方法:用DMEM/F12血清培養(yǎng)基純化培養(yǎng)新生SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,接種后培養(yǎng)7天,NSE染色進(jìn)行神經(jīng)元純度鑒定后隨機(jī)分為正常對(duì)照組和不同阿霉素濃度組,根據(jù)阿霉素劑量不同分為ADM:0.5mg/L;ADM:1.0mg/L;ADM:2.0mg/L;ADM:5.0mg/L;ADM:10mg/L)。各實(shí)驗(yàn)組阿霉素作用
2、時(shí)間為4小時(shí),對(duì)照組換用無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,再分別測(cè)定加入藥物前后背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞MTT代謝率、乳酸脫氫酶(LDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的變化。 結(jié)果:(1)原代培養(yǎng)的大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)正常,有神經(jīng)突起生長(zhǎng)和標(biāo)記蛋白的表達(dá),可達(dá)到90%左右的純度。(2)阿霉素實(shí)驗(yàn)組的DRG細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比有顯著差
3、異性(P<0.05),阿霉素實(shí)驗(yàn)組中隨著藥物濃度的增加凋亡率逐漸升高,但在ADM10m/L組中,細(xì)胞的凋亡率降低,而且出現(xiàn)了壞死細(xì)胞。3)阿霉素實(shí)驗(yàn)組的MTT代謝率、LDH活性、SOD活性和MDA含量與對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05),阿霉素使背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的LDH活性、MDA含量增加,同時(shí)降低了MTT代謝率、SOD活性。阿霉素對(duì)MTT代謝率、LDH活性、SOD活性和MDA含量的影響具有劑量依賴性趨勢(shì)。 結(jié)論:阿霉素對(duì)原代
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