昆蟲病原線蟲優(yōu)良品系的篩選及生物學(xué)特性分析.pdf

1、昆蟲病原線蟲作為一種重要的生物防治因子，越來越受到人們的重視。本研究對在山東地區(qū)采集的122份土樣進行了線蟲分離和篩選，得到異小桿線蟲JNR，擴增其ITS基因和D2-D3基因，并構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，進行系統(tǒng)進化分析。確定其分類地位。同時，對其生物學(xué)特性進行了研究，以發(fā)掘其生防潛力。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)在山東省濟南、青島、泰安、濟寧、菏澤、濰坊6個市下13個區(qū)縣采集土樣122份，土樣蟲檢出率為16.39％。研究了昆蟲病原線蟲的

2、分布與土壤質(zhì)地、植被類型以及濕度之間的關(guān)系。數(shù)據(jù)分析表明:沙壤土線蟲檢出率最高，占28％，沙土18.87％，壤土8.57％。調(diào)查顯示，不同植被類型的土壤，線蟲檢出率不同。出線蟲率最高的是果樹，其次是田地和無植被的荒地。另外土壤濕度在15-25％左右時，線蟲發(fā)生的概率較大。
　　(2)分離得到線蟲B、JN11、JNR、TD、HZ、QD，并篩選出殺蟲效果較好的JNR。
　　(3)通過對昆蟲病原線蟲JNR通過分子生物學(xué)鑒定，擴增其

3、ITS基因和D2-D3基因，片段大小分別為992 bp、898 bp，結(jié)合Genebank中，已知種類的相關(guān)基因序列，進行同源性比對，構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，確定其為嗜菌異小桿線蟲H.bacteriophora。
　　(4)通過測定不同劑量下線蟲JNR對大蠟螟的侵染效果，結(jié)果表明，不同劑量下，線蟲對試蟲的侵染效果不同，校正死亡率隨著濃度增加而增大，在48 h增加最多。24 h后在低劑量10～60 IJs/頭下，線蟲對大蠟螟的校正死亡率為0

4、％，當濃度達到120 IJs/頭以上有侵染效果;在較高劑量120、240 IJs/頭下，72 h后寄主的校正死亡率均達到100％。
　　(5)探討了溫度、濕度對昆蟲病原線蟲的存活率和侵染力的影響。發(fā)現(xiàn)，線蟲JNR有較好的耐熱性，38℃條件下能存活近32 h;40℃水浴處理2h，低濃度500 IJs/mL下3h后全部死亡。在較高溫度處理下，嗜菌異小桿線蟲JNR均表現(xiàn)出了不同程度的侵染力。38℃時仍具有侵染活力，當溫度過高超過40℃也

5、不利于嗜菌異小桿線蟲的侵染。在溫度5℃、10℃下，線蟲JNR可以存活數(shù)天，在低溫下的侵染力隨溫度升高而增加。室內(nèi)測定線蟲需要的濕度為1000μL/皿1。
　　(6)研究了不同溫度下線蟲的水平運動能力及侵染周期，在30℃以內(nèi)，線蟲的水平運動能力隨溫度增加而增強;同一溫度下，昆蟲病原線蟲JNR在瓊脂培養(yǎng)基上的水平運動能力隨時間延長而增強。18℃下，24 h僅有5％的線蟲，25℃時，有10％的線蟲個體運動達到3.6cm，當溫度為30℃，

6、則有31％的個體。JNR在室溫25℃條件下，對大蠟螟的致死時間需要44 h，明顯快于海濱斯氏線蟲S.litorale和線蟲S.ceratophorum，嗜菌異小桿線蟲JNR侵染效果較好。線蟲JNR在30℃的侵染周期時間短于25℃，且比另外兩種線蟲更適合高溫條件。
　　(7)通過測定線蟲JNR在不同劑量下對蠐螬的致病力，結(jié)果表明，嗜菌異小桿線蟲在較高劑量下對蠐螬的防效較好，500 IJs/頭處理72 h，校正死亡率達到88％，96