PARP-1-AIF通路在大鼠實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期細(xì)胞凋亡中的作用和意義.pdf

1、目的:
　　 檢測(cè)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后，在廣譜天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(caspases)抑制劑(Z-VAD-FMK)作用下，海馬組織半胱氨酸天冬酶3(Caspase3)和多聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶-1[poly(ADP-ribose)-polymerase1，PARP-1]和凋亡誘導(dǎo)因子(apoptosis-inducing factor，AIF)的表達(dá)情況；與海馬組織細(xì)胞凋亡關(guān)系，以及SAH后神經(jīng)功能評(píng)分的關(guān)

2、系。探討Caspase凋亡途徑受抑制后PARP-1/AIF途徑對(duì)大鼠海馬組織細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法:
　　 雄性SD大鼠分為空白對(duì)照組、模擬手術(shù)組，非抑制組(SAH+DMSO)(24h、48h、72h)和抑制組(SAH+Z-VAD-FMK)(24h、48h、72h)，SAH模型為大鼠單次視交叉池注血模型。抑制組大鼠SAH造模后1h立即將廣譜caspases抑制劑Z-VAD-FMK行大鼠右側(cè)腦室緩慢注射，非抑制組則注

3、射相同量的DMSO。各組大鼠處死前用平衡木實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠的神經(jīng)功能，然后麻醉后用多聚甲醛灌注處理，1h后取出腦組織，HE觀察海馬組織炎癥反應(yīng)強(qiáng)度；免疫組化測(cè)定海馬組織Caspase3、PARP-1和AIF表達(dá)；末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(terminaldeoxynucleotidal transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling，TUNEL)檢測(cè)海馬組織細(xì)胞凋

4、亡程度。比較空白對(duì)照組、模擬手術(shù)組和SAH后各時(shí)間組神經(jīng)功能評(píng)分，大鼠海馬組織炎癥反應(yīng)強(qiáng)度，Caspase3、PARP-1和AIF表達(dá)改變，海馬組織細(xì)胞凋亡數(shù)量變化。
　　 結(jié)果:
　　 1與空白對(duì)照組和模擬手術(shù)組大鼠比較，SAH后各組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分在6h降低明顯，提示神經(jīng)功能減退嚴(yán)重，12h后開始恢復(fù)，24小時(shí)仍明顯(p<0.05)，之后逐漸恢復(fù)，到72h已與空白對(duì)照組和模擬手術(shù)組SD大鼠評(píng)分無差異(p>0.05)。

5、Z-VAD-FMK治療組大鼠與安慰劑(1％DMSO)組大鼠相比神經(jīng)功能評(píng)分無明顯差異(p>0.05)。
　　 2 HE染色顯示，與空白對(duì)照組和模擬手術(shù)組大鼠比較，SAH大鼠海馬區(qū)組織在24h炎性細(xì)胞滲出明顯增多，48h后開始減少；Z-VAD-FMK治療組各時(shí)間段炎性細(xì)胞滲相比非抑制組輕。
　　 3同空白對(duì)照組、模擬手術(shù)組大鼠相比，SAH組大鼠海馬組織Caspase-3蛋白表達(dá)水平有明顯差異性(P<0.05)，SAH各組在

6、后24h升高明顯，48h、72h緩慢下降但仍處于較高表達(dá)水平(p<0.05)；Z-VAD-FMK治療組各時(shí)間點(diǎn)Caspase-3蛋白表達(dá)水平相比非抑制組明顯低(p<0.05)，組內(nèi)各時(shí)間段比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 4與空白對(duì)照組和模擬手術(shù)組大鼠相比，SAH組大鼠海馬組織AIF蛋白表達(dá)水平有明顯差異性(P<0.05)，抑制組大鼠海馬區(qū)組織AIF表達(dá)水平在SAH后24h升高明顯，48h達(dá)峰值，后逐漸下降。非抑制組AI

7、F表達(dá)水平明顯低于抑制組，在24h達(dá)峰值。非抑制組和抑制組比較差有明顯差異性(P<0.05)，組內(nèi)各時(shí)間段比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 5 SAH抑制組大鼠海馬區(qū)組織PARP-1表達(dá)水平在24h升高明顯，在72h達(dá)峰值。非抑制組PARP-1表達(dá)水平明顯低于抑制組(p<0.05)，在48h達(dá)峰值。SAH組個(gè)時(shí)間點(diǎn)PARP-1表達(dá)水平均高于空白對(duì)照組和模擬手術(shù)組(P<0.05)。組內(nèi)各時(shí)間段比較無差異(P>0.05)。<

8、br>　　 6空白對(duì)照組和模擬手術(shù)組海馬組織及周圍僅見個(gè)別陽性細(xì)胞。SAH后24h、48h、72h各時(shí)間段抑制組比非抑制組凋亡陽性率低(p<0.05)，但與空白對(duì)照組和模擬手術(shù)組相比陽性細(xì)胞率均增高明顯(P<0.05)
　　 結(jié)論:
　　 1、大鼠SAH后立即出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損，后逐漸恢復(fù)，72h后與空白對(duì)照組無差異。
　　 2、大鼠SAH后，雖然應(yīng)用Caspase廣譜抑制劑Z-VAD-FMK能使海馬組織細(xì)胞凋亡