煙酰胺在實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血小鼠早期腦損傷中的腦保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討煙酰胺在實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血小鼠早期腦損傷中的腦保護(hù)作用。
　　方法：①小鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型的建立及分組。中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供雄性 C57BL/6J小鼠（25-30g）55只（麻醉及手術(shù)過程中死亡小鼠不計(jì)算在內(nèi)）。分為四組：SAH+煙酰胺組（n=15只）、SAH+生理鹽水組（n=14只）、SAH組（n=16只）、假手術(shù)組（n=10只）。用血管內(nèi)穿刺法建立小鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。假手術(shù)組穿刺過程只感到阻力但不穿

2、破血管。SAH+煙酰胺組術(shù)后立即腹腔注射煙酰胺（500mg/kg）；SAH+生理鹽水組術(shù)后立即注射相同體積的生理鹽水；蛛網(wǎng)膜下腔出血組及假手術(shù)組未進(jìn)行任何藥物治療。SAH術(shù)后24h統(tǒng)計(jì)死亡率。②神經(jīng)病學(xué)評(píng)分。每組各10只小鼠，SAH術(shù)后24小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)病學(xué)評(píng)分。神經(jīng)病學(xué)評(píng)分采用Garcia評(píng)分系統(tǒng)，總分為3—18分。③腦水腫的檢測(cè)。每組各5只小鼠，腦干濕重法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血小鼠術(shù)后24h的腦含水量，即腦水腫。④每組各5只小鼠，實(shí)

3、驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔小鼠術(shù)后24h提取出血側(cè)皮層腦組織蛋白并定量后Western blot法檢測(cè)皮層腦組織活化型caspase-3、pAkt、Akt蛋白的表達(dá)水平，然后用ImageJ軟件進(jìn)行灰度測(cè)定，再進(jìn)行半定量分析。⑤所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用 SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，統(tǒng)計(jì)方法采用單因素方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，死亡率比較采用卡方檢驗(yàn)，取P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴死亡率：本實(shí)驗(yàn)總死亡

4、率約為27.27％。其中假手術(shù)組無死亡。SAH+煙酰胺組33.3%， SAH+生理鹽水組28.57％，SAH組37.5%，SAH+煙酰胺組與SAH+生理鹽水組及SAH組相比較死亡率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。⑵神經(jīng)病學(xué)評(píng)分，SAH+煙酰胺組為12.77±1.30，SAH+生理鹽水組為10.22±1.48， SAH組為10.11±1.96，假手術(shù)組術(shù)后24小時(shí)為17.40±0.55，四組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。24h后小鼠神經(jīng)病學(xué)評(píng)分SA

5、H+煙酰胺組優(yōu)于SAH+生理鹽水組及SAH組小鼠(P

6、510±0.035）較SAH+生理鹽水組及SAH組表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05），較假手術(shù)組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05）；SAH+生理鹽水組（0.324±0.087）與SAH組（0.323±0.022）相比較，表達(dá)水平不變(P＞0.05)；⑸Akt的表達(dá)水平：四組之間比較總Akt蛋白表達(dá)水平不變，分別為SAH+煙酰胺組（0.875±0.021），SAH+生理鹽水組(0.873±0.025），SAH組（0.875

7、±0.015）,假手術(shù)組（0.876±0.019），組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。⑹活化型caspase3表達(dá)水平：SAH+煙酰胺組表達(dá)水平（0.522±0.034）較SAH+生理鹽水組及SAH組表達(dá)水平明顯下降，較假手術(shù)組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05）；SAH組（0.842±0.019）及SAH+生理鹽水組（0.829±0.023）表達(dá)水平升高較明顯，兩組之間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；假手術(shù)組無表達(dá)，

8、為（0.083±0.005），假手術(shù)組與其他三組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05）。
　　結(jié)論：①煙酰胺可減輕實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血小鼠術(shù)后24小時(shí)的腦水腫，可改善出血后神經(jīng)病學(xué)評(píng)分，可能具有腦保護(hù)作用，但不影響實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血小鼠術(shù)后24h的死亡率。②蛛網(wǎng)膜下腔出血早期PKB通路可能即被激活，而煙酰胺則可抑制實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血小鼠術(shù)后24h皮層腦組織pAkt蛋白下降，而總Akt的表達(dá)水平不變，抑制皮層腦組織的細(xì)胞凋亡，而