水稻苯達松和磺酰脲類除草劑抗性基因Bel的載體構(gòu)建與轉(zhuǎn)化.pdf

1、本文克隆了水稻苯達松敏感突變體Bel基因，構(gòu)建植物表達載體，并將該基因分別導入擬南芥、油菜(Brassica napus)、煙草，驗證基因功能，研究其表達情況、抗藥特性和遺傳規(guī)律，為培育出抗苯達松和磺酰脲類除草劑的油菜新品種和該基因應用于雜交制種打下基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 1、提取水稻品種日本晴總RNA，通過RT-PCR，得到基因Bel的ORF片段，其長度為1542bp。將Bel基因克隆到pGEM-T Easy載體，經(jīng)測序及同源序

2、列比對，確定得到的Bel基因序列與GenBank中的AK104825序列一致。 2、以質(zhì)粒pCAMBIA3301為基礎(chǔ)，構(gòu)建了以bar基因為選擇標記的植物表達載體pCAMBIA3301-BEL，其中目的基因Bel替換了原質(zhì)粒中的GUS基因片段。表達載體經(jīng)酶切鑒定正確。 3、用蘸花的方法轉(zhuǎn)化擬南芥，經(jīng)Basta篩選得到轉(zhuǎn)化植株32株，PCR檢測初步確定目的片段已整合進擬南芥基因組中。 4、取轉(zhuǎn)基因擬南芥4株，提取R

3、NA，經(jīng)RT-PCR檢測基因的表達情況，結(jié)果表明該基因能正常表達，表型與對照無明顯差異。 5、對生長3周左右的轉(zhuǎn)基因擬南芥后代進行抗藥性試驗，對三種除草劑分別設立了濃度梯度，得出了轉(zhuǎn)化株對不同除草劑的有效使用范圍，其中苯達松是48％的濃度稀釋4000X-16000X，稻無草是0.1g/L-3g/L，Basta是18.5％的濃度稀釋167X.10000X，為該基因的實際應用提供了依據(jù)。 6、用蘸花的方法轉(zhuǎn)化了油菜，通過除草