葛根解酒液和葛根素對(duì)大鼠酒精性肝病治療作用的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建大鼠酒精性肝病動(dòng)物模型，探索酒精性肝病的發(fā)病機(jī)制；探討葛根及葛根素對(duì)酒精性肝病的治療作用。 材料及方法：健康SD大鼠108只，雌雄各半，體重180-220g。隨機(jī)分為五組，治療組藥物選用葛根解酒液(自制)和葛根素注射液(山東瑞陽(yáng)制藥有限公司)。 A組(模型對(duì)照組)：36只，生理鹽水灌了胃10ml/kg．day，分別于4W、8W、12w各處死12只取材檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。 B組(模型組)：36只，56％酒精灌胃

2、10ml/kg．day，分別于4W、8W、12W各處死12只取材檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。 C組(葛根解酒液治療組)：12只，56％酒精灌胃10ml/kg．day，連續(xù)12W；從9W開始另加腹腔注射葛根解酒液,0.01g/kg．day；于12w全部處死取材檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。 D組(葛根素治療組)：12只，56％酒精灌胃10ml/kg．day，連續(xù)12W；從9W開始腹腔注射葛根素0.01g/kg．day；于12W全部處死取材檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。

3、 E組(治療對(duì)照組)：12只，56％酒精灌胃10ml/kg．day，連續(xù)12W；從9W開始腹腔注射生理鹽水0.01ml/kg．day；于12W全部處死取材檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。 檢測(cè)大鼠血清ALT、AST及鐵含量、SOD活力及MDA含量；檢測(cè)肝組織中SOD活力及MDA含量，并通過(guò)RT-PCR檢測(cè)肝hepcidin的表達(dá)；取大鼠肝組織塊于4％多聚甲醛固定24小時(shí)，常規(guī)組織制片(切片為5 μm)、艇染色、免疫組化；取部分肝組織進(jìn)行冰

4、凍切片(切片為20μm)蘇丹Ⅳ染色，光鏡下觀察。 結(jié)果： (1)一般情況108只大鼠共103只完成實(shí)驗(yàn)周期，實(shí)驗(yàn)期間模型組2只大鼠因灌胃誤嗆入肺而導(dǎo)致死亡，有3只因不能長(zhǎng)期耐受酒精而死亡，A組大鼠均存活。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，B組和E組大鼠較A組大鼠精神狀態(tài)差、毛發(fā)光澤差、食欲差、大便溏瀉、反應(yīng)遲鈍、而且活動(dòng)減少，體重增長(zhǎng)緩慢(P<0.01)，肝指數(shù)明顯增加(P<0.01)； C組和D組在治療期間(9-12W)大鼠精神狀態(tài)都比治療

5、前較好，活動(dòng)增多，體重增長(zhǎng)與E組相比較快(P<0.01)、肝指數(shù)減小(P<0.01)，但兩個(gè)治療組(C組和D組)體重增長(zhǎng)都比A組慢(P<0.01)；C組和D組體重增長(zhǎng)幅度及肝指數(shù)無(wú)明顯差異(P>0.05)。 (2)大鼠血清ALT、AST含量B組與A組比較，B組的血清ALT、AST及鐵含量明顯增高(P<0.01)； C組、D組與B組、E組比較，C組和D組的血清ALT、AST及鐵含量明顯降低(P<0.01)。C組與D組比較，兩組的A

6、LT和AST含量無(wú)明顯差異(P>0.05)。 (3)大鼠血清SOD活力及MDA含量B組與A組比較，B組SOD活力明顯降低(P<0.01)、MDA含量明顯升高(P<0.01)；C組、D組與B組比較，C組和D組SOD活力明顯增高(P<0.05)、MDA含量明顯降低(P<0.01)；C組與D組比較，兩組的SOD活力及MDA含量無(wú)明顯差異(P>0.05)。 (4)大鼠肝組織SOD活力及MDA含量與A組比較，B組SOD活力明顯降低

7、(P<0.01)、MDA含量明顯升高(P<0.01)；與B組比較，C組和D組SOD活力明顯增高(P<0.01)、MDA含量明顯降低(P<0.01)；C組與D組比較， SOD活力及MDA含量無(wú)明顯差異(P>0.05)。 (5)肝巨視觀及肝組織HE染色觀察結(jié)果A組：大鼠肝表面光滑呈暗紅色，鏡下見肝小葉結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝細(xì)胞排列成肝索，在中央靜脈周圍呈放射狀分布，細(xì)胞呈多邊形，大小較一致。 B組：大鼠肝腫大，表面粗糙呈灰黃色，

8、4W肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松，胞質(zhì)內(nèi)可見大小不等的少量脂滴空泡；8W模型組大鼠肝細(xì)胞排列紊亂，胞質(zhì)內(nèi)可見大量脂滴空泡；12W見肝細(xì)胞大量變性壞死，鏡下見脂滴空泡占整個(gè)視野中所有細(xì)胞的85％以上，脂肪變細(xì)胞所占比例明顯高于A組、C組和D組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。 C組：12W大鼠肝腫大較B組有所緩解，顏色呈淡黃色，肝細(xì)胞索整齊，胞質(zhì)內(nèi)可見少量脂滴空泡，脂肪變細(xì)胞所占比例明顯低于B組和E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。

9、D組：12W大鼠肝腫大較B組有所緩解，顏色呈淡黃色，肝細(xì)胞索整齊，胞質(zhì)內(nèi)可見少量脂滴空泡，脂肪變細(xì)胞所占比例明顯低于B組和E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。 E組：12W見肝細(xì)胞大量變性壞死，鏡下見脂滴空泡占整個(gè)視野中所有細(xì)胞的90％以上，同B組一樣，脂肪變細(xì)胞所占比例明顯高于A組、C組和D組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。 (6)肝組織蘇丹Ⅳ染色結(jié)果A組：12W見極少量的肝細(xì)胞胞漿內(nèi)橘紅色染色； B組：1

10、2W見肝細(xì)胞內(nèi)大量大小不等的橘紅色染色； C組：12W見肝細(xì)胞內(nèi)少量大小不等的橘紅色染色： D組：12W見肝細(xì)胞內(nèi)少量大小不等的橘紅色染色； E組：12W見肝細(xì)胞內(nèi)大量大小不等的橘紅色染色。 (7)大鼠肝組織TNF-α、IL-6免疫組化結(jié)果A組：大鼠肝組織腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-alpha，TNF-α)和白細(xì)胞介素-6(imerleukin-6，IL-6)免疫組化染色

11、，有2只大鼠的肝組織細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)見少量棕黃色顆粒沉積，其余大鼠肝組織細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)無(wú)棕黃色顆粒沉積： B組：4W處死的大鼠的部分肝組織細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)見少量棕黃色顆粒沉積：8W的肝組織細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)棕黃色顆粒在顏色和數(shù)量上比4W明顯；12W的細(xì)胞胞漿內(nèi)棕黃色顆粒在顏色和數(shù)量上比8W明顯： C組：12W處死的大鼠肝組織細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)見少量棕黃色顆粒沉積； D組：12W處死的大鼠肝組織細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)見少量棕黃色顆粒沉

12、積； E組：12W處死的大鼠肝組織細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)見大量棕黃色顆粒沉積； 組間比較：12W處死的大鼠肝組織中TNF-α的陽(yáng)性表達(dá)率，B組高于A組(P<0.01)，B組高于C組和D組(P<0.05)，C組和D組低于E組(P<0.05)，E組高于A組(P<0.01)，C組和D組沒有顯著性差異(P>0.05)； 12W處死的大鼠肝組織中IL-6的陽(yáng)性表達(dá)率，B組高于A組、C組和D組(P<0.01)，C組和D組低于E組(P

13、<0.1)，E組高于A組(P<0.01)，C組和D組沒有顯著性差異(P>0.05)； (8)RT-PCR結(jié)果五組大鼠肝組織中β-actin mRNA表達(dá)量相同(P>0.05)；B組大鼠肝組織Hepcidin mRNA的表達(dá)比A組下降(P<0.01)，而C組和D組大鼠肝組織Hepcidin mRNA的表達(dá)比B組和E組增加(P<0.01)：C組和D組大鼠肝組織Hepcidin mRNA的表達(dá)無(wú)顯著差異(P>0.05) 結(jié)論：