葛根素對兔膝骨性關(guān)節(jié)炎保護(hù)作用的研究.pdf

1、背景和目的：
　　骨性關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一組有不同病因但生物學(xué)、形態(tài)學(xué)和臨床表現(xiàn)相似的慢性、進(jìn)展性關(guān)節(jié)疾病，發(fā)生在全身多個關(guān)節(jié)，以膝關(guān)節(jié)最為多見，其病變常累及整個關(guān)節(jié)，包括關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨、滑膜等組織。OA的病理特征包括關(guān)節(jié)軟骨變性、壞死，關(guān)節(jié)邊緣軟骨下骨反應(yīng)性增生、硬化，骨贅形成，進(jìn)而引起滑膜炎癥等。近年發(fā)現(xiàn)，骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨的細(xì)胞外基質(zhì)合成與降解失衡是造成軟骨變性的重要因素，基質(zhì)金屬蛋白酶對關(guān)節(jié)

2、軟骨細(xì)胞外基質(zhì)有降解作用，使關(guān)節(jié)軟骨腫脹，抗外力作用下降，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性破壞，骨性關(guān)節(jié)炎形成。臨床可通過熱療、推拿、針灸等物理方法來緩解癥狀，通過促進(jìn)潤滑液分泌或關(guān)節(jié)腔注入潤滑液來減少關(guān)節(jié)摩擦，甚至通過微創(chuàng)手術(shù)清理關(guān)節(jié)腔或手術(shù)置換關(guān)節(jié)。上述治療方案均可不同程度上緩解癥狀，但均存在輕重不等的副作用或手術(shù)風(fēng)險，因此尋找高效且副作用較小的新治療方案是當(dāng)前的重要課題。
　　葛根素（puerarin，Pue）是中藥葛根的主要有效成分

3、之一，臨床上應(yīng)用葛根素靜脈滴注和關(guān)節(jié)腔給藥治療均顯示葛根素對骨關(guān)節(jié)炎有效，但其治療的作用機(jī)制尚不十分清楚。本文旨在觀察葛根素對兔膝骨性關(guān)節(jié)炎的治療效果及其作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用該藥治療骨性關(guān)節(jié)炎提供理論依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　將60只新西蘭白兔隨機(jī)分為3組，每組20只，分別為正常組、模型組、葛根素治療組。正常組不造模作為對照，模型組用內(nèi)側(cè)半月板部分切除的方法制作膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎模型，葛根素治療組在造模2周后開始用葛根素注射

4、液關(guān)節(jié)內(nèi)注射，每周一次，連續(xù)8周。分別在第6周和第10周兩個時間點(diǎn)進(jìn)行以下指標(biāo)觀察：拍膝關(guān)節(jié)X線片，觀察軟骨下骨的硬化情況；肉眼觀察關(guān)節(jié)軟骨及滑膜形態(tài)；采集血清和關(guān)節(jié)液，測定其NO、iNOs、SOD、MDA水平；制備軟骨及滑膜石蠟切片進(jìn)行HE及AB-PAS染色，光鏡下對軟骨和滑膜進(jìn)行病理評分；TUNEL法檢測軟骨細(xì)胞凋亡狀況；免疫組織化學(xué)染色法檢測Bcl-2、MMP-13和TIMP-1蛋白在軟骨中的表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　

5、　1、X線檢查顯示：與正常組相比，模型組和葛根素治療組的動物在6周時內(nèi)側(cè)關(guān)節(jié)間隙狹窄，脛骨平臺軟骨下骨密度輕微增高，有少許骨贅生成。與6周相比，10周時上述病理變化更加明顯。
　　2、肉眼觀察結(jié)果顯示：正常組兔膝關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)面光滑，軟骨透明，無明顯缺損和新生物，滑膜無充血。6周時，可見模型組膝關(guān)節(jié)有重度病變，葛根素治療組病變減輕。10周時的模型組關(guān)節(jié)面明顯粗糙，軟骨不透明，有明顯缺損和新生物，滑膜色暗充血腫脹；葛根素治療組軟骨色澤較

6、暗，可見較表淺潰瘍，透明度差，有少到中等量骨贅形成。
　　3、顯微鏡下觀察：HE染色結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組動物關(guān)節(jié)軟骨的完整性均不同程度的遭到破壞，軟骨中不同程度的新生血管和纖維化變，葛根素組的變化明顯減輕；且兩組動物中，10周組較6周組病變嚴(yán)重。AB-PAS染色見造模的兩組動物有不同程度的基質(zhì)失染。
　　4、生化檢測結(jié)果：6周時，與正常組相比，模型組關(guān)節(jié)滑液和血清的NO、iNOS和MDA含量顯著升高，SOD顯著降低

7、（P＜0.05）；葛根素治療組的NO、iNOS、SOD和MDA含量變化不明顯。10周時，與正常組相比，模型組關(guān)節(jié)滑液和血清NO、iNOS和MDA含量顯著升高，SOD顯著降低（P＜0.01），葛根素治療組關(guān)節(jié)滑液和血清NO、iNOS和MDA含量顯著升高，SOD顯著降低（P＜0.05）。
　　5、免疫組化結(jié)果：與正常組相比，模型組和葛根素治療組的凋亡指數(shù)、Bcl-2和MMP-13的表達(dá)均顯著增強(qiáng)，TIMP-1表達(dá)顯著性降低，葛根素治療

8、組的上述變化明顯減弱。10周模型組和葛根素治療組MMP-13表達(dá)比6周明顯增多，TIMP-1的表達(dá)顯著性降低。
　　結(jié)論：
　　1、葛根素關(guān)節(jié)腔注射治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎可減輕滑膜炎癥和關(guān)節(jié)軟骨病變，減少潰瘍、骨贅形成，從而延緩?fù)孟ス切躁P(guān)節(jié)炎的病變進(jìn)展。
　　2、葛根素通過改變血液和滑膜液中NO、iNOS、SOD、MDA的水平，調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨中Bcl-2、MMP-13、TIMP-1蛋白的表達(dá)，減少軟骨細(xì)胞凋亡，對骨性關(guān)節(jié)炎