散發(fā)性大腸癌DNA甲基化的臨床病理意義及其和遺傳學(xué)機(jī)制的關(guān)系研究.pdf

1、散發(fā)性大腸癌DNA甲基化的臨床病理意義及其和遺傳學(xué)機(jī)制的關(guān)系研究 目的：研究散發(fā)性大腸癌的抑癌基因啟動子甲基化和臨床病理學(xué)特征以及遺傳學(xué)改變(微衛(wèi)星不穩(wěn)定、染色體不穩(wěn)定以及相關(guān)癌基因、抑癌基因表達(dá))的關(guān)系，探討表遺傳學(xué)檢測的臨床意義以及表遺傳學(xué)機(jī)制和遺傳學(xué)機(jī)制之間的相互關(guān)系。 方法：對71例散發(fā)性大腸癌(SCRC)采用甲基化特異性PCR的方法行p14*~、hMLHl、p16I~4,、MGMT和MINTl共5個基因啟動子甲

2、基化的檢測，選擇BAT25和BAT26兩個位點(diǎn)進(jìn)行微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)檢測、進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測分析倍體類型以及進(jìn)行p14ARF、hMLHl、pi6Ira'、MGMT、k-ras、APC、p53、BAX和TGFβRII共9個基因的免疫組化檢測。分析p14^~、hMLHl、p16INK4a、MGMT和MINTl基因啟動子甲基化以及CpG島甲基子表型(CIMP)和SCRC臨床病理特征、MSI、染色體不穩(wěn)定(CIN)以及相關(guān)基因表達(dá)的關(guān)系。

3、 結(jié)果：第一部分：1、p14^~、hMLHl、p16I~4,、MGMT和MINTl基因啟動子甲基化的陽性率分別為28．2％(20／71)、9．9％(7／71)、25·4％(18／71)、36·6％(26／71)和49．3％(35／71)，CIMP陽性率為21．1％(15／71)；2、hMLHl基因啟動子甲基化(+)的SCRC具有右半結(jié)腸癌多發(fā)(p=--O．018)和低分化癌多見(p=--O．032)的特征。pi6I~4'基因啟動子

4、甲基化(+)的SCRC具有結(jié)腸癌多發(fā)(P=--O．043)、低分化癌多見(p=--0．000)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移多見(p=--O·034)、分期較晚(p=--O．046)的特征。p14^~、MGMT和MINTl三個基因的啟動子甲基化均和各項(xiàng)臨床病理學(xué)指標(biāo)無顯著性關(guān)系；3、CIMP(+)SCRC中右半結(jié)腸癌(40％vsl2．5％。P=-O．024)、低分化癌(46．7％vsl4．3％，P=-O．012)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(86·7％vs48．2％，P

5、=-O．008)、TNMIII／Ⅳ期(86．7％vsSO．O％，P=-O．O¨)所占比例均顯著高于CIMP(一)者。第二部分：1、71例患者共檢出二倍體18例，異倍體50例(3例因Cv值大于8％從分析中剔除)；2、MSI的陽性率為9·9％(7／71)，所有陽性者均為BAT25和BAT26同時陽性；3、除了MGMT外，p14ARF(p=--O·062)、hMLHl(p=--O．074)、p16INK4a(P=O．053)和MINTl(p=

6、--O．002)基因啟動子甲基化均表現(xiàn)為二倍體多發(fā)的傾向。但是僅MINTl基因啟動子甲基化和二倍體的關(guān)系達(dá)到統(tǒng)計學(xué)顯著性意義。CIMP(+)者也表現(xiàn)為二倍體多發(fā)的顯著性特點(diǎn)(P=O·003)；4、hMLHl(p=--O．001)和MINTl(P=O．055)基因啟動子甲基化(+)者具有MSI多見的傾向。p14^~、p16'sK4~、MGMT基因啟動子甲基化和MSI無顯著性關(guān)系。CIMP(+)者中MSI的陽性率大于CIMP(一)者(20．

7、0％vs7．1％)，但尸值為O·158，未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)顯著性意義：5、微衛(wèi)星和染色體穩(wěn)定型(微衛(wèi)星穩(wěn)定且為二倍體，MACS型)SCRC的hMLHl基因啟動子甲基化的陽性率顯著低于MSI型(MSI，無論二倍體或異倍體)(7．7％vs57．1％，p=--0．031)，MINTl基因啟動子甲基化的陽性率顯著高于CIN型(微衛(wèi)星穩(wěn)定且為異倍體)(69．2％vs35·4％，P=O．029)，p16'~4,基因啟動子甲基化陽性率似高于CIN型(46．

8、2％vsl6·7％，P=0．057)。MACS型的CIMP陽性率顯著高于CIN型(46．2％vs8．3％，p=--0·004)，而MACS型和MSI型在CIMP陽性率方面無顯著性差異。第三部分：1、p14ARF、hMLHl、D16I~4'、M6MT、k-ras、APC、p53、BAX和TGFBRII蛋白陽性表達(dá)率分別為68·6％(48／70)、76．8％(53／69)、6L8％(42／68)、87．3％(62／71)、43．7％(31／

9、71)、42．3％(30／71)、47．9％(34／71)、7L4％(50／70)和59．2％(42／71)；2、hMLHl(P=--O．046)、MGMT(P=O．010)基因的啟動子甲基化和相應(yīng)基因的失表達(dá)密切相關(guān)，而p14^~和p16'~4,基因啟動子甲基化和相應(yīng)基因的失表達(dá)無顯著性關(guān)系；3、MINTl基因啟動子甲基化和突變型p53蛋白表達(dá)密切相關(guān)(P=--O·024)，MINTl基因啟動子甲基化(+)者突變型p53蛋白陽性表達(dá)率

10、低于MINTl基因啟動子甲基化(一)者；4、MGMT基因啟動子甲基化(+)者具有k-ras蛋白高表達(dá)的趨勢(P=--O．070)。CIMP和APC、p53、BAX、TGFBRII蛋白表達(dá)均沒有顯著性關(guān)系，但和k-ras蛋白表達(dá)顯著相關(guān)(P=O．043)，CIMP(+)者k-ras蛋白陽性表達(dá)率顯著高于CIMP(一)者。 結(jié)論：第一部分：hMLHl、p16INK4a基因啟動子甲基化和CIMP具有顯著的臨床病理學(xué)意義。hMLHl基因

11、啟動子甲基化(+)的SCRC具有右半結(jié)腸癌多發(fā)和低分化癌多見的顯著性特征。p16INK4a基因啟動子甲基化(+)的SCRC具有結(jié)腸癌多發(fā)、低分化癌多見、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移多見和分期較晚的顯著性特征。CIMP(+)的SCRC具有右半結(jié)腸癌多發(fā)、低分化癌多見、常有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分期較晚的顯著性特點(diǎn)。第二部分：1、MINTl、hMLHl基因啟動子甲基化以及CIMP和基因組遺傳學(xué)不穩(wěn)定性(CIN和MSI)具有密切的關(guān)系。MINTl基因啟動子甲基化(+)者

12、及CIMP(+)者均表現(xiàn)為二倍體多發(fā)的顯著性特點(diǎn)，而hMLHl基因啟動子甲基化(+)者則具有MSI多見的顯著性特點(diǎn)；2、MACS型的SCRC是SCRC的一個獨(dú)立亞型，具有和CIN型及MSI型不同的獨(dú)特的臨床病理和基因表達(dá)特征。MACS型SCRC的hMLHl基因啟動子甲基化的陽性率顯著低于MSI型，MINTl基因啟動子甲基化的陽性率顯著高于CIN型，CIMP陽性率顯著高于CIN型。提示多基因同時甲基化可能為MACS型SCRC的重要發(fā)病機(jī)制

13、。hMLHl基因啟動子甲基化可能為MSI型SCRC的特異性發(fā)病機(jī)制，而在MACS型SCRC的發(fā)生發(fā)展過程中可能并不扮演重要角色；3、CIN、MSI和多基因啟動子甲基化(CIMP)三者之間反映了表遺傳學(xué)機(jī)制和遺傳學(xué)機(jī)制既相互競爭又相互依存的復(fù)雜關(guān)系。CIN機(jī)制是相對獨(dú)立于MSI機(jī)制及表遺傳學(xué)機(jī)制(多基因啟動子甲基化)之外的。MSI機(jī)制和表遺傳學(xué)機(jī)制可能是一種相互依存的關(guān)系，但不是完全重疊的關(guān)系，相當(dāng)一部分的MSI發(fā)生在表遺傳學(xué)機(jī)制的基礎(chǔ)上

14、，但也有部分的MSI并沒有顯著的表遺傳學(xué)背景。第三部分：1、hMLHl、MGMT基因啟動子甲基化和相應(yīng)基因的失表達(dá)密切相關(guān)；2、MINTl基因啟動子甲基化(+)者呈現(xiàn)突變型p53蛋白低表達(dá)的顯著性特點(diǎn)；3、MGMT基因啟動子甲基化(+)者具有k—ras蛋白高表達(dá)的傾向(P=-O．070)。而這種關(guān)系可能是通過MGMT蛋白的失活導(dǎo)致k-ras基因突變引起的；3、CIMP和k-fas蛋白的激活表達(dá)密切相關(guān)。這種關(guān)系可能是通過MGMT基因啟動