膜聯(lián)蛋白A5在散發(fā)性大腸癌中的表達(dá)及其與大腸癌分期及預(yù)后的相關(guān)性研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文膜聯(lián)蛋白A5在散發(fā)性大腸癌中的表達(dá)及其與大腸癌分期及預(yù)后的相關(guān)性研究姓名：邢俊杰申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)（普通外科）指導(dǎo)教師：孟榮貴20090601第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文首先，我們由正常人胎盤組織中克隆得到了膜聯(lián)蛋白A5的基因編碼區(qū)全長序列，并通過亞克隆技術(shù)將其裝載入真核表達(dá)載體pcDNA31()。我們收集了51例病例完整、背景清楚的散發(fā)性大腸癌患者組織樣本作為研究對象，同時獲得了51例非惡性腸道疾病患者

2、的組織樣本作為對照。通過免疫組織化學(xué)實驗，我們首先對腫瘤樣本中p53、Ki67這兩個腫瘤臨床診斷上較為常用的標(biāo)志物進(jìn)行了分析，并分別根據(jù)p53的突變情況和Ki一67增殖指數(shù)對51例腫瘤組織樣本進(jìn)行了歸類。隨后我們選擇了目前功能較為清楚的膜聯(lián)蛋白A5作為切入點(diǎn)，借助熒光實時定量PCR和免疫組織化學(xué)等實驗手段，分別從mRNA水平和蛋白質(zhì)水平上對膜聯(lián)蛋白A5在組織樣本中的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測。研究結(jié)果顯示：膜聯(lián)蛋白A5的表達(dá)水平在散發(fā)性大腸癌組

3、織中發(fā)生了上調(diào)；同時A5在腫瘤組織中的表達(dá)變化與p53的突變和Ki一67增殖指數(shù)分別呈正相關(guān)。這一結(jié)果提示我們膜聯(lián)蛋白A5與大腸癌的惡化、增殖等特征具有相關(guān)性，可能在其中起著重要的作用，并且膜聯(lián)蛋白A5能夠作為一種腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于大腸癌的臨床診斷，因此具有臨床應(yīng)用價值。在此基礎(chǔ)上，我們擴(kuò)大樣本量，選擇了176例病例完整、背景清楚的散發(fā)性大腸癌患者組織樣本作為研究對象。手術(shù)切除標(biāo)本后，分別配對取其大腸癌變部位組織以及正常組織。然后通過實時

4、定量PCR和免疫組化染色的方法鑒定每個標(biāo)本的膜聯(lián)蛋白A5的mRNA和蛋白表達(dá)情況。實時定量PCR結(jié)果顯示腫瘤中的膜聯(lián)蛋白A5的mRNA水平上調(diào)。免疫組化結(jié)果顯示膜聯(lián)蛋白A5在405％的腫瘤之中高表達(dá)。同時進(jìn)行嚴(yán)格詳細(xì)的術(shù)后隨訪。通過統(tǒng)計數(shù)據(jù)判斷膜聯(lián)蛋白A5的表達(dá)與病理分期和預(yù)后之間的關(guān)系。我們的研究結(jié)果顯示，膜聯(lián)蛋白A5的表達(dá)情況可以作為一個有價值的分子標(biāo)記物，用來預(yù)測患者外科手術(shù)切除腫瘤后的預(yù)后。無論是進(jìn)行單變量分析還是多變量分析，我

5、們的研究數(shù)據(jù)都顯示，膜聯(lián)蛋白A5的表達(dá)情況和患者5年生存率的降低以及腫瘤復(fù)發(fā)率的提高都有很強(qiáng)的相關(guān)性。多變量分析顯示，膜聯(lián)蛋白A5的表達(dá)情況可以作為一個獨(dú)立的預(yù)測因子用來預(yù)測預(yù)后。因此，不考慮腫瘤的病理分期而僅用腫瘤組織中的膜聯(lián)蛋白A5表達(dá)水平也可以預(yù)測患者的術(shù)后預(yù)后。另外，膜聯(lián)蛋白A5表達(dá)水平也可作為術(shù)前預(yù)測治療效果的一個預(yù)測因子。我們的研究提示，膜聯(lián)蛋白A5在大腸癌的生長、進(jìn)展以及轉(zhuǎn)移等過程中可能扮演了一個相當(dāng)重要的角色。在組織水平