活化富血小板血漿上清液移植在心肌梗死后組織修復(fù)中的作用：血小板旁分泌機(jī)制與心肌梗死后心室重塑.pdf

1、目的：干細(xì)胞治療心肌梗死的臨床試驗(yàn)未體現(xiàn)出與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一致的良好療效，出現(xiàn)這一矛盾的原因尚不明確。臨床試驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的較大差別之一是在臨床試驗(yàn)中患者常采取抗血小板治療?？寡“逯委熞种屏搜“宓酿じ健⒕奂?，同時(shí)也抑制了血小板的釋放功能。血小板的分泌顆粒(致密顆粒、α-顆粒和溶酶體)可釋放多種蛋白如血小板源性生長(zhǎng)因子(Platelet Derived Growth Factor，PDGF)、血小板因子4(Platelet Factor 4，

2、PF<,4>)和vW因子(Von Willebrand Factor，vWF)等，同時(shí)循環(huán)的血小板還攜帶如血小板內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular Endothelial GrowthFactor，VEGF)、基質(zhì)源性因子(Stromal．Derived Factor-1，SDF-1)和堿性成纖維生長(zhǎng)因子(Basic Fibroblast Growth Factor，bFGF)等一類的因子。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，這些因子對(duì)各種損傷的愈合有著重要的促

3、進(jìn)作用。因此,血小板的釋放功能在損傷愈合中所起的作用有可能在抗血小板治療中被抑翩，而在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中卻不存在這一現(xiàn)象。于是我們?cè)O(shè)想臨床上抗血小板治療對(duì)血小板釋放功能的抑制有可能是導(dǎo)致各大隨機(jī)對(duì)照雙盲臨床試驗(yàn)與基礎(chǔ)研究結(jié)果不盡一致的原因之一。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)向大鼠梗死心肌內(nèi)注射血小板釋放因子，旨在檢測(cè)移植活化后富血小板血漿上清液在大鼠心肌梗死后修復(fù)中的作用，初步探討激活的血小板在心肌梗死后組織修復(fù)中的作用。 方法：經(jīng)腹主動(dòng)脈抽取健

4、康成年Wistar大鼠的血液，采用二次離心法制作富血小板血漿(Platelet Rich Plasma，PRP)和貧血小板血漿(Platelet Poor Plasma，PPP)，凝血酶激活后提取上清液，低溫凍存。選取6-8周Wistar大鼠，隨機(jī)分為PRP組、對(duì)照組和假手術(shù)組；結(jié)扎Wistar大鼠冠脈前降支建立急性心肌梗死模型，結(jié)扎大鼠冠脈前降支后立即向缺血的周邊區(qū)域注射100μL富血小板血漿上清液或貧血小板上清液。于術(shù)后第7天和28

5、天處死動(dòng)物，一部分大鼠用含有15％KCl的冰PBS灌流后立即行壓力-容積曲線測(cè)定，另一部分大鼠用冰PBS灌流后低溫凍存用以組織學(xué)分析。心肌組織橫斷面切片經(jīng)過(guò)天狼猩紅染色后，在偏振光顯微鏡下結(jié)合圖像分析軟件分析梗死壁厚度、梗死面積、膨展程度，在環(huán)形偏振光顯微鏡下結(jié)合圖像分析軟件分析膠原重構(gòu)；采用免疫組化方法，于熒光顯微鏡下結(jié)合圖像分析軟件分析新生血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞以及心肌橫斷面積。 結(jié)果：相對(duì)于對(duì)照組，PRP組28天舒張壓力

6、-容積曲線左移，提示PRP組梗死后左室整體擴(kuò)張程度減小。PRP組7天和28天梗死區(qū)游離壁厚度大于對(duì)照組。PRP組28天梗死面積小于對(duì)照組。PRP組7天的膨展指數(shù)小于對(duì)照組；PRP組28天的膨展指數(shù)較對(duì)照組有減小的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。7天和28天PRP組和對(duì)照組梗死區(qū)以及室間隔的膠原容積分?jǐn)?shù)均呈上升的趨勢(shì)，7天和28天PRP組梗死區(qū)膠原容積分?jǐn)?shù)均較對(duì)照組明顯增高；雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但PRP組室間隔的膠原容積分?jǐn)?shù)有比對(duì)照組減小的趨勢(shì)。環(huán)形偏

7、振光顯微鏡下綠、黃、橙、紅色膠原反應(yīng)了膠原由細(xì)至粗的過(guò)程，7天梗死區(qū)PRP組的綠色膠原含量比對(duì)照組明顯增多，28天梗死區(qū)PRP組的綠色膠原含量比對(duì)照組明顯減少，而28天梗死區(qū)PRP組的橙色膠原比對(duì)照組明顯增多。7天和28天PRP組非梗死區(qū)心肌細(xì)胞橫斷面積明顯小于對(duì)照組。7天和28天PRP組梗死區(qū)和非梗死區(qū)小動(dòng)脈長(zhǎng)度密度大于對(duì)照組。7天和28天PRP組梗死區(qū)和非梗死區(qū),毛細(xì)血管密度大于對(duì)照組。 結(jié)論：活化富血小板血漿上清液移植可改