韶關(guān)市流感病毒流行及其主要流行毒株的HA1基因變異研究.pdf

1、流行性感冒(以下簡稱流感)是第一個實行全球監(jiān)測的傳染病，由流感病毒引起。流感病毒的抗原性變異與流感的發(fā)生和流行密切相關(guān)，尤其以血凝素HA1基因的變異最為重要。1997年香港禽H5N1流感病毒感染人以及1999年韶關(guān)市發(fā)生禽H9N2流感病毒感染人的事件后，韶關(guān)市按照上級要求加強了流感的監(jiān)測。這十年來流感病毒感染產(chǎn)生了怎樣的變化，原來的防控策略是否需要調(diào)整，怎樣應(yīng)對流感活動的頻繁帶來的新挑戰(zhàn)，未作過研究分析。本研究為分析韶關(guān)流感病毒感染狀況

2、與流行的特征，掌握本地區(qū)主要流感流行毒株H3亞型和B型流感病毒血凝素HA1基因的變異情況，填補本地區(qū)流感病毒分子生物學研究的空白，為防治流感提供科學對策。 研究目的： 1.分析韶關(guān)市流感病毒感染狀況，掌握流感流行的特征。 2.分析韶關(guān)市主要流感流行毒株H3亞型及B型病毒血凝素HA1基因的變異情況，填補本地區(qū)流感病毒分子生物學研究的空白。 材料與方法： 1.材料 1.1收集韶關(guān)市現(xiàn)存1998

3、年至今流感監(jiān)測資料。 1.2流感病毒H3亞型及B型毒株來源：韶關(guān)市疾控中心保存的歷年流感毒株。 2.研究方法： 2.1用描述性流行病學方法對韶關(guān)市流感流行情況進行分析。 2.2用MDCK細胞復蘇凍存的流感毒株，選擇滴度較高的毒株測定血凝素(HA1)基因序列，使用Bio-edit、DNAStartMegAlign，Clustal-W、TreeviewX等生物軟件包對序列進行編輯、比對、進化分析。 研

4、究結(jié)果： 1.韶關(guān)市1998～2007年流感流行情況1998～2007年共采集流感樣患者標本5062人份，經(jīng)分離鑒定流感病毒陽性303株，分離率為5.99％；在303株流感病毒株中，H3亞型流感病毒245株(80.86％)，B型流感病毒34株(11.22％)，H1N1流感病毒20株(6.60％)，首次發(fā)現(xiàn)禽H9N2流感病毒感染人，并檢出4株(1.32％)禽H9N2流感病毒；10年中共報告疫情128起，以3～7月份為爆發(fā)高峰，以中

5、、小學校居多，以H3亞型流感病毒引起的疫情見多，其次為B型流感病毒；共采集一般人群血清596份，流感病毒H1、H3、B1、B2型抗體陽性率分別為57.72％，69.30％、40.77％、27.68％：共采集職業(yè)暴露人群血清366份，流感病毒H5N1和H9N2抗體陽性率分別是0.27％和33.08％。 2.韶關(guān)市H3亞型流感病毒HA1基因的氨基酸變異與代表株A/Panama/2007/99相比，所測毒株同源性從91.3％-93.8

6、％，在5個抗原決定蔟共14個氨基酸發(fā)生變異，RBS上有6個位點發(fā)生變異，各毒株均在不同的位點上增加了一個糖基化位點：與代表株A/Fujian/411/02比較，所測毒株同源性從90.2％-97.7％，18個氨基酸變異發(fā)生在5個抗原決定蔟，10個氨基酸變異發(fā)生在RBS，SG199-99，SGy009-08分別增加了一個糖基化位點；與代表株A/wisconsin/67/05比較，同源性從88.3％-98.4％，共有14個氨基酸變異發(fā)生在5個

7、抗原決定蔟，RBS上有9個氨基酸發(fā)生變異，各毒株均在不同的位點上增加了一個糖基化位點：本次研究的毒株變異率逐漸下降，變異最活躍的兩個氨基酸位點第158和173位氨基酸分別位于B和D抗原決定蔟。 3.韶關(guān)市B型流感病毒HA1基因的氨基酸變異本次測得的B型Y系毒株與B型代表株B/Sichuan/379/99比較，同源性是95.0％和95.3％，共有6個氨基酸變異分別位于A，B和E抗原決定蔟，其中194位氨基酸位于RBS，均在167增

8、加了一個糖基化位點。與代表株B/Florida/4/2006相比，同源性為97.6％和98.5％，有3個氨基酸變異位于抗原決定蔟A，B，E區(qū)，其中194位氨基酸位于RBS，SGy010-08在196位增加了1個糖基化位點。SG173-99與SGy010-08之間有9個氨基酸發(fā)生了變異，其中6個氨基酸位于A，B，E抗原決定蔟。 本次測得的B型V系毒株與B型代表株B/HongKon/330/2001相比，同源性是93.8％和97.7

9、％，其中有4個氨基酸變異分別位于A，C，E抗原決定蔟，兩毒株均在第212位增加了一個糖基化位點。與代表株B/Malaysia/2506/2004相比，同源性是95.6％和99.4％，其中1個氨基酸變異位于C抗原決定蔟。SG538-05與SGy139-06之間有13個氨基酸發(fā)生了變異，其中第53位氨基酸在C區(qū)抗原決定蔟。 研究結(jié)論： 1.韶關(guān)市流感流行的高峰與報道基本一致，多年的流行優(yōu)勢株為為甲型流感病毒(H3亞型)。

10、 2.首次發(fā)現(xiàn)H9亞型流感病毒自然感染人，為人禽流感感染主要是禽類傳染給人提供了參考。 3.韶關(guān)地區(qū)H3亞型流感病毒在十年間發(fā)生了三次抗原性漂移，分別是1999年、2002或2003年、2007年。從2008年的氨基酸變異情況得知，H3亞型流感病毒的抗原性漂移有增強的趨勢。 4.不同年份的B型Y系流感毒株抗原性發(fā)生了變異，2008年分離株SGy010-08相對于代表株B/Florida/4/2006的改變還沒導致抗原