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文檔簡介
1、肝癌是最常見的惡性腫瘤之一,惡性程度高,預后差。隨著分子生物學的發(fā)展,基因治療給惡性腫瘤的治療帶來了曙光。腫瘤的基因治療,特別是腫瘤的自殺基因療法,已經成為繼傳統(tǒng)的手術切除、放療、化療等方法后的一種新的抗腫瘤治療措施。但單純自殺基因治療由于目前載體轉染效率較低、靶向性不夠等問題沒解決,仍有部分腫瘤細胞殘余導致腫瘤復發(fā),這是該療法存在的重大缺陷。因而增強旁殺傷效應目前已成為提高腫瘤自殺基因治療療效的重要策略。由于縫隙連接機制是旁觀者效應的
2、重要機制,故改善腫瘤的細胞間信息交流(GJIC)是自殺基因療法增效的重要途徑之一。同時,以往的研究證明:六味地黃丸有提高cAMP的作用,而cAMP的提高又能增加Cx蛋白的表達,從而提高GJIC功能而增強自殺基因治療的旁殺傷效應。 本研究應用中藥復方血清藥理學的方法將自殺基因HSV1-tk/GCV系統(tǒng)與六味地黃丸在體外實驗中聯合,以大鼠肝癌細胞CBRH7919為對象進行了初步研究。通過研究以期為臨床自殺基因療法聯合中藥復方的中西醫(yī)
3、結合治療方案的建立提供實驗數據、科學依據及前期工作基礎。 目的:本實驗旨在以往研究的基礎上,應用中藥復方血清藥理學方法將六昧地黃丸和HSV1-tk/GCV系統(tǒng)聯合,進行大鼠肝癌細胞CBRH7919自殺基因治療的體外實驗。初步探討其機制,為建立中西醫(yī)結合腫瘤基因治療方案提供必要條件。 方法: 1.六味地黃丸藥物血清和空白血清的制備:SD大鼠(230~280g),分為對照組和六味地黃丸給藥組(藥物劑量為等效劑量的6~
4、8倍)。灌胃又分為四天血清組和八天血清組。末次給藥后1小時腹主動脈取血,-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?2. HSV1-tk/GCV自殺基因系統(tǒng)的構建(導師課題組在前期工作中已經完成) 3. HSV1-tk/GCV系統(tǒng)聯合六味地黃丸含藥血清治療療效觀察:MTT法檢測大鼠肝癌細胞CBRH7919對GCV的敏感性以及對大鼠血清(對照血清和六味地黃丸含藥血清)的敏感程度,以確定用藥濃度。選擇對細胞抑制率低的濃度進行實驗。用金正鈞Q值分
5、析六味地黃丸含藥血清與自殺基因系統(tǒng)聯合作用對旁殺傷效應是否具有協(xié)同性。Q值為聯合用藥時實測藥效與理論藥效的比值,Q<0.85為拮抗作用;0.85≤Q<1.15為相加作用;Q≥1.15為協(xié)同作用。 4.六味地黃丸含藥血清對自殺基因治療系統(tǒng)旁殺傷增效機制的研究:用流式細胞技術檢測凋亡指數;SLDT法觀察六味地黃丸含藥血清對CBRH7919的GJIC功能的影響。 結論:本研究在細胞水平探討了六味地黃丸含藥血清增強自殺基因療法療
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