染料木黃酮對去勢小鼠脾細胞凋亡及雌激素受體亞型表達的影響.pdf

1、背景：隨著植物雌激素在圍絕經(jīng)期婦女中的廣泛應用，有關它的研究也越來越多。關于植物雌激素，尤其是染料木黃酮(GEN)的免疫調節(jié)作用已引人注目。但關于染料木黃酮對免疫細胞凋亡及免疫細胞上雌激素受體亞型影響的研究仍很少。 目的：本研究擬觀察并比較GEN和雌二醇(E2)對去勢小鼠脾細胞凋亡及相關調控基因Fas、FasL的影響，同時比較GEN和雌二醇對雌激素受體亞型表達的影響，為染料木黃酮的臨床應用提供理論和實驗依據(jù)。 材料與方法

2、: 本實驗取10周齡BALB／C小鼠(由復旦大學實驗動物部提供)，分為3組：去勢組(行雙側卵巢切除術，OVX)、假手術組、青年對照組。去勢組于術后5天起行陰道脫落細胞涂片，連續(xù)5天均未出現(xiàn)角化細胞為手術成功。假手術小鼠即將10周齡BALB／C小鼠雙側腹下區(qū)進腹取少量脂肪組織后關腹。OVX小鼠及假手術小鼠在術后第¨天與青年組同時無菌取脾，研磨，制備脾細胞懸液，假手術組及青年對照組脾細胞懸液放入未加藥的培養(yǎng)液中，OVX小鼠脾細胞懸液

3、放入含有不同藥物的培養(yǎng)液中。根據(jù)培養(yǎng)液中所含藥物及藥物濃度的不同將OVX小鼠分為：去勢+E2(10^-5umol／1、10^-4umol／l、lO^．3umol／、10A-2umol／四個濃度)、去勢+GEN(3．7umol／1、18．5umol／l、37．0umol／1、92．5umol／1四個濃度組)、去勢+溶劑(DMSO)組、去勢空白對照組，共計12組。然后將標本放入培養(yǎng)箱(37~C、5~~C02)培養(yǎng)72h后，一部分細胞懸液采用

4、Annexin-FITC、PI雙重染色后流式細胞儀測定脾細胞凋亡率；另一部分細胞懸液待提取脾細胞總RNA，RT-PCR技術檢測脾細胞上Fas、FasL凋亡基因及ERa、ERBmRNA的表達。 結論: 與青年對照相比，去勢小鼠脾細胞凋亡率增加，F(xiàn)as、FasL基因表達增加，ERa、ERβ基因表達降低。脾細胞凋亡的增加可能與Fas、FasL基因表達的增多有關。 與雌二醇相似，染料木黃酮在高濃度時，增加去勢小鼠脾細胞的

5、凋亡率，同時Fas、FasL基因的轉錄水平也升高。提示染料木黃酮、雌二醇致脾細胞凋亡可能與上調凋亡促進基因Fas、FasL基因表達有關。 低劑量的雌二醇脾細胞凋亡率及Fas、FasL基因與青年組無差異，低濃度染料木黃酮脾細胞凋亡率及Fas、FasL基因與青年組無差異，染料木黃酮和雌二醇均可能逆轉去勢小鼠脾細胞凋亡。 不同濃度雌二醇對脾細胞上ERa、ERB基因表達的影響體現(xiàn)了雌二醇對ER的雙相調節(jié)作用：在生理范圍內為正向調