RASSF1基因在胃癌中的表達及臨床意義.pdf

1、胃癌(Gastric Cancer,GC)是最常見的胃部腫瘤,來源于上皮的惡性腫瘤。是我國最常見的惡性腫瘤之一。胃癌的基因研究是診斷、治療及防治胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的基本途徑之一。胃癌和其他人類惡性腫瘤一樣,都是多基因病變,其發(fā)生和發(fā)展不僅與刺激細胞異常增殖的腫瘤基因(Ocogene)變異及高表達有關(guān),也直接和細胞中的抑制細胞突變和異常增殖的抑癌基因(Tumor SuppressorGene,TSG)功能失活相隨。
　　 2000年D

2、ammann等用酵母雙雜交篩選方法在3號染色體短臂(3p21.3)克隆出一個抑癌基因,由于其核苷酸序列的碳端(C-terminus)與小鼠RAS相關(guān)區(qū)域家族1(RAS association domain family1)及小鼠RAS效應(yīng)蛋白Norel高度同源,遂命名為RAS相關(guān)區(qū)域家族1,即RASSF1基因。RASSF1基因至少存在7個不同的剪接體(剪接體A-G)。但其中的三個主要的剪接體,即RASSF1A、RASSF1B和RAS5F

3、1C,由6個外顯子順序拼接而成。這三個剪接體均共用3-6外顯子,編碼Ras相關(guān)區(qū)域。
　　 研究目的:1.主要通過觀察RASSF1基因三個剪接體(-A,-B,-C)在胃癌組織和胃癌細胞系中的表達水平,初步探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用；2.進一步研究RASSF1B基因在腫瘤細胞中的表達及其克隆與序列分析,為深入研究RASSF1B基因的生物學(xué)功能及作用機制奠定基礎(chǔ)。
　　 研究方法:1.利用半定量RT-PCR檢測RASSF1

4、基因的三種剪接體在胃癌細胞系BGC-823和SGC-7901,以及胃癌組織和癌旁組織中的表達水平；2.利用半定量RT-PCR檢測RASSF1B基因在胃腺癌(AGS)、高轉(zhuǎn)移肺癌(95D)、肺腺癌(LTEP-a-2)、肝癌(HEPG21和白血病細胞(U937)中的表達水平,并從AGS中克隆RASSF1B基因,運用生物信息學(xué)方法對其進行序列分析。
　　 研究結(jié)果:1.RASSF1基因三個剪接體(-A,-B,-C)在BGC-823細胞

5、中相對表達量分別為0.27、0.96、0.79,在SGC-7901細胞中相對表達量分別為0.62、0.85、0.98。2.在60例胃癌組織中RASSF1A,RASSF1B表達缺失率分別為60.2％(37／60),25％(15／60),RASSF1C基因在胃癌組織及癌旁組織表達率相近約為86.7％(55／60)。3.RASSF1B基因在肺腺癌細胞株LTEP-a-2和白血病細胞株U937中表達量較高,序列分析顯示該基因含有一個Ras結(jié)合區(qū)域

6、。
　　 研究結(jié)論:1.RASSF1基因三種剪接體在胃癌不同分化程度的細胞系BGC-823和SGC-7901細胞中均有表達,且RASSF1A基因在低分化的BGC-823細胞中的表達量明顯低于中分化的SGC-7901細胞；25臣過對60例胃癌患者及癌旁正常組織中3種不同剪接體的表達研究發(fā)現(xiàn),RASSF1基因三種剪接體在胃癌組織中表達均下調(diào),RASSF1B和RASSF1C在胃癌中的表達差異無顯著性,RASSF1C無論在癌抑或癌旁正常

7、組織中均全部表達,因此RASSF1C不是胃癌的抑癌基因,而與其來自同一DNA因不同剪接所產(chǎn)生的RASSF1A,在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達則有顯著性差異,癌旁正常組織幾乎全部表達,而相匹配的癌組織中卻存在較高的RASSF1A mRNA的表達缺失。進一步支持了RASSF1A基因作為胃癌候選抑癌基因的論斷。3.發(fā)現(xiàn)在不同的癌變細胞系中,RASSF1B基因雖都有表達,但表達量存在明顯的差異,在提示RASSF1B基因可能與腫瘤的類型有關(guān),并