胃癌患者血清RASSF1A基因啟動子區(qū)甲基化檢測及臨床意義.pdf

1、南方醫(yī)科大學碩士學位論文胃癌患者血清RASSF1A基因啟動子區(qū)甲基化檢測及臨床意義姓名：劉暢申請學位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學（消化內(nèi)科）指導教師：朱人敏20090602摘要化研究具有一定的臨床前景。目前胃癌患者血清R A S S F l A 啟動子異常甲基化方面的研究十分有限，國內(nèi)尚未見報道?！灸康摹恳酝哪[瘤標志物如C E A 對胃癌診斷來說有很多的局限性。尋找新的腫瘤標志物為胃癌的早期診斷提供前景。本研究的主要目的是檢測胃癌患者血清、

2、腫瘤組織及癌旁組織R A S S F l A 基因啟動子區(qū)異常甲基化情況，并探討其與臨床參數(shù)之間的關(guān)系，探討其在胃癌早期診斷和預后評估中的可能作用。【材料和方法】甲基化特異性聚合酶鏈反應( m e t h y l a t i o n s p e c i a lP C R ，M S P ) 是一種快速、敏感的基因甲基化檢測方法，靈敏度高，可用于微量分析和同源基因分析，該方法不僅能避免限制性內(nèi)切酶消化不完全所致的假陰性，而且假陽性率低，為檢

3、測血清離微量基因甲基化提供了可能。它將D N A 先用重亞硫酸鹽處理，這樣未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?，而甲基化的不變，隨后行引物特異性的P C R 。M S - P C R 中設(shè)計兩對引物，并要求：1 ．引物末端均設(shè)計至檢測位點結(jié)束；2 。兩對引物分別只能與重亞硫酸鹽處理后的序列互補配對，即一對結(jié)合處理后的甲基化D N A 鏈，另一對結(jié)合處理后的非甲基化D N A 鏈。檢測M S P 擴增產(chǎn)物，如果用針對處理后甲基化D N A 鏈的引