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1、目的:了解原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌及浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞中趨化因子及其受體的表達(dá)情況,分析它們與原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。
方法:1、收集原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的癌及癌旁組織標(biāo)本,一部分新鮮組織勻漿,制備單細(xì)胞懸液,離心后收集上清備用。將離心后的沉淀重懸,用人淋巴細(xì)胞分離液分離出淋巴細(xì)胞。將另一部分組織,浸泡在福爾馬林中固定后,制成蠟塊切片。2、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)石蠟切片中趨化因子和受體的陽(yáng)性表達(dá)情況。3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分
2、離出的淋巴細(xì)胞內(nèi)趨化因子和受體的表達(dá)情況。4、ELISA方法檢測(cè)收集的組織上清中趨化因子和受體的表達(dá)情況。5、統(tǒng)計(jì)所有標(biāo)本來(lái)源的患者資料,分組對(duì)比不同臨床病理特征患者的趨化因子和受體的表達(dá)差別。
結(jié)果:1、免疫組化法檢測(cè)癌組織中IP-10、MCP-1、IL-8、RANTES、CXCR4、CXCR1、CCR5的陽(yáng)性表達(dá)率,分別為44.1%、64.7%、41.2%、47.1%、76.5%、82.4%、70.6%;癌旁組織中相應(yīng)的表
3、達(dá)率分別為20.6%、41.2%、17.6%、23.5%、52.9%、58.8%、47.1%。癌組織中的各種因子陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁組織。其中CXCR1、CCR5均為胞質(zhì)表達(dá),而CXCR4可表達(dá)于胞質(zhì)和胞膜,但以胞質(zhì)為主。 IP-10、MCP-1、IL-8、RANTES均為胞質(zhì)表達(dá)。2、分析因子和受體與臨床病理特征的相關(guān)性,結(jié)果表明,肝癌癌組織中的MCP-1、RANTES和CXCR1的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤包膜的完整或受侵呈正相關(guān)關(guān)系。而CX
4、CR4、CCR5的表達(dá)則與腫瘤是否有血管侵犯呈正相關(guān)。癌旁組織中的IL-8、CXCR1、CXCR4和CCR5的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤包膜的完整或受侵呈正相關(guān)。而MCP-1、RANTES、CXCR4和CCR5的表達(dá)則與腫瘤是否有血管侵犯呈正相關(guān)。3、癌組織中浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞流式檢測(cè)表明CXCR4、IP-10、MCP-1表達(dá)均高于癌旁組織中浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞,且P<0.05。但檢測(cè)IL-8、RANTES、CXCR1、CCR5的表達(dá)情況則相反,癌組織中浸
5、潤(rùn)的淋巴細(xì)胞表達(dá)較低,P<0.05。4、ELISA檢測(cè)原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的癌組織及癌旁組織上清中趨化因子表達(dá)情況,與流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果相同,ELISA結(jié)果顯示IP-10表達(dá)是癌組織組大于癌旁組織組,相反,IL-8則是癌旁組織組較高。
結(jié)論:三種不同方法檢測(cè)癌及癌旁組織趨化因子和受體的表達(dá)情況,以及腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的趨化因子分泌能力,提示癌組織組和癌旁組織組有顯著差異。一些因子與肝癌包膜是否完整、血管受侵有一定的相關(guān)性。提示趨化因
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