裂褶菌液體發(fā)酵條件及發(fā)酵產(chǎn)物的藥理活性研究.pdf

1、裂褶菌Schizophyllum Commune Fr.是一種源自俄羅斯民間的珍稀大型真菌，被廣泛用于防治疑難雜癥，特別是癌癥。近年來(lái)，對(duì)于它的化學(xué)成分和藥理作用的研究已經(jīng)日益引起國(guó)內(nèi)外研究人員的重視，但是樺褐孔菌大規(guī)模的人工馴化還沒有實(shí)現(xiàn)，其來(lái)源主要是靠采集，這使樺褐孔菌的開發(fā)利用受到了限制，而液體發(fā)酵培養(yǎng)恰能彌補(bǔ)這一不足。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)液提深層發(fā)酵獲得菌絲體，研究了菌絲體和發(fā)酵液的藥理作用，主要包括其體外抑菌作用，胞外粗多糖的抗腫瘤活性

2、及其機(jī)理和粗多糖的抗腫瘤活性，胞內(nèi)(外)粗多糖的抗炎作用，并對(duì)胞內(nèi)多糖的提取工藝進(jìn)行了研究。 1.本文所得結(jié)果表明，裂褶菌液體發(fā)酵的最適培養(yǎng)基配方為：葡萄糖20g、玉米粉50g、KH2PO43.0 g/L、MgSO41.5 g/L。當(dāng)培養(yǎng)溫度為28℃，搖瓶裝量30％，轉(zhuǎn)速120r/min，液體菌種接種量12％，搖瓶培養(yǎng)時(shí)間11天時(shí)所得菌絲干重最大。 2.本文采用紙片擴(kuò)散法和菌餅法對(duì)裂褶菌菌絲體及發(fā)酵液的抑菌活性進(jìn)行了初步

3、研究。利用4種細(xì)菌：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷沙門氏、腸炎沙門氏做指示菌，結(jié)果顯示裂褶菌菌絲體及發(fā)酵液均能抑制4種指示菌的生長(zhǎng)，說(shuō)明裂褶菌的菌絲體及發(fā)酵液中均含有抑菌活性成分，其菌絲體的抑菌活性成分主要在正丁醇提取物中。 3.本文利用正交實(shí)驗(yàn)分別研究了水提取，超聲提取和微波提取裂褶菌菌絲體多糖的最優(yōu)工藝。根據(jù)極差分析確定了熱水浸提法的最優(yōu)工藝為浸提時(shí)間4小時(shí)、浸提5次、液料比50、浸提溫度90℃多糖提取率為13.45％；微波

4、提取法的最優(yōu)工藝為微波處理20min、液料比60、提取4次，提取率為10.8％；超聲提取法的最優(yōu)工藝為超聲40min、提取4次、液料比60、溫度50℃、頻率70Hz，提取率為19.53％。 用超聲波法和醇沉法分別提取了菌絲體和發(fā)酵液中的粗多糖，其粗多糖得率分別為：每100g干菌絲體得18.85g粗多糖；每1000ml發(fā)酵液得7.76g粗多糖。用苯酚硫酸法測(cè)定菌絲體和發(fā)酵液粗多糖中多糖含量為78.42％，64.63％。 4

5、.初步研究了裂褶菌胞外粗多糖對(duì)實(shí)體瘤小鼠及腹水瘤小鼠腫瘤的抑制作用。以空白對(duì)照組生理鹽水，陽(yáng)性藥組復(fù)方環(huán)磷酰胺，給藥組裂褶菌的胞外粗多糖(高劑量組：500mg/kg，中劑量組：250mg/kg，低劑量組125mg/kg)對(duì)小鼠肉瘤S180和肝癌H22的抑瘤率進(jìn)行了初步研究，以胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)為指標(biāo)對(duì)綜合考察裂褶菌胞外粗多糖的高抑瘤活性和低毒性特征，并測(cè)得了腫瘤小鼠血清中IL-18和TNF-α的含量，簡(jiǎn)單說(shuō)明了裂褶菌胞外粗多糖抗腫瘤的作

6、用機(jī)理。胞外粗多糖對(duì)肉瘤S180小鼠的抑瘤率，中劑量組最高可達(dá)到49.03％，低劑量組次之為36.41％，對(duì)于肝癌H22的抑瘤率，中劑量組最高可達(dá)51.54％，低劑量組次之為42.29％，高劑量組也可達(dá)到35.62％，說(shuō)明裂褶菌的胞外粗多糖能有效抑制肉瘤S180小鼠和肝癌H22小鼠的腫瘤生長(zhǎng)，且給藥組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均明顯高于空白對(duì)照組，說(shuō)明裂褶菌胞外粗多糖在一定程度上能增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力。兩種腫瘤小鼠血清中IL-18和TNF-α的

7、含量均有提高，這在另一層面上說(shuō)明裂褶菌胞外多糖主要是以提高機(jī)體免疫力而起到抗腫瘤作用的。對(duì)腹水瘤小鼠肉瘤S180和肝癌H22的生命延長(zhǎng)率的研究結(jié)果表明裂褶菌胞外粗多糖能明顯延長(zhǎng)腹水瘤小鼠的生存時(shí)間，對(duì)肉瘤S180小鼠平均能延長(zhǎng)1.08d，對(duì)肝癌H22小鼠平均能延長(zhǎng)2.78d。 5.采用與胞外粗多糖同樣方法對(duì)裂褶菌的胞內(nèi)粗多糖進(jìn)行了抗腫瘤活性研究，結(jié)果表明胞內(nèi)粗多糖的三個(gè)劑量組對(duì)小鼠肉瘤S180和肝癌H22的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用

8、。胞內(nèi)粗多糖對(duì)肉瘤S180小鼠的抑瘤率高劑量組最高達(dá)48.28％，中劑量組次之為39.85％，低劑量組也可達(dá)35.25％，對(duì)肝癌H22小鼠的抑瘤率高劑量組最高達(dá)40.71％，中劑量組次之為35.50％，低劑量組也可達(dá)33.21％，說(shuō)明裂褶菌的胞內(nèi)多糖對(duì)小鼠肉瘤S180和肝癌H22的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用；且給藥組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均明顯高于空白對(duì)照組，說(shuō)明裂褶菌胞內(nèi)粗多糖能增強(qiáng)小鼠機(jī)體的免疫能力。 6.以空白對(duì)照組生理鹽水，陽(yáng)性

9、藥組消炎痛(10mg/kg)，給藥組裂褶菌的胞內(nèi)粗(外)多糖(高劑量組：500mg/kg，中劑量組：250mg/kg，低劑量組125mg/kg)對(duì)二甲苯至小鼠耳腫脹抑制作用進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明裂褶菌胞內(nèi)粗(外)多糖對(duì)二甲苯至小鼠耳腫脹均有極顯著的抑制作用，且在一定程度上提高了小鼠的免疫能力。其中裂褶菌的胞內(nèi)粗多糖高、中、低劑量組的腫脹抑制率分別為34.43％，22.68％，16.44％；裂褶菌的胞外粗多糖高、中、低劑量組的腫脹抑制率