裂褶菌活性多糖發(fā)酵及酶解技術研究.pdf

1、裂褶菌胞外多糖(Schizophyllan，SPG)是一種大分子量的真菌多糖，其特殊的β-(1,3)主鏈和β-(1,6)支鏈結(jié)構，讓其具有高度的免疫活性和抗腫瘤活性。SPG可從裂褶菌水提得到，亦可由純培養(yǎng)的裂褶菌發(fā)酵得到。通過不同菌種的裂褶菌培養(yǎng)得到的胞外多糖分子量不同。其中，重均分子量Mw=4.5×105 Da的SPG 已經(jīng)開發(fā)作為臨床抗腫瘤佐劑。
　　 本文通過對本實驗室保藏的裂褶菌(Schizophyllum commun

2、e IRB0917)進行胞外多糖(SPG)合成的培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基優(yōu)化，以及發(fā)酵物預處理技術和特定分子量多糖酶促降解技術的探索，取得了以下主要成果：
　　 (1)建立了高產(chǎn)SPG發(fā)酵物預處理技術及工藝：菌體沸水浴抽提兩次，每次2 h，合并抽提液和發(fā)酵原液后，獲得的多糖產(chǎn)量與不進行處理的相比，可提高55%；采用透析袋處理發(fā)酵液，再醇析得到粗多糖，可得到脫色效果理想的粗多糖，且粗多糖保留率92.85%；
　　 (2)建立了裂褶

3、菌多糖含量測定的剛果紅染色法，經(jīng)測定，本實驗室得到的粗多糖含量為86.28%；
　　 (3)優(yōu)化了裂褶菌胞外多糖的培養(yǎng)條件：溫度28-30 ℃，初始pH5.6，搖瓶裝液量100 ml/250 ml 三角瓶，培養(yǎng)周期168 h，轉(zhuǎn)速180 rpm，此條件下獲得胞外多糖產(chǎn)量為10.80g/L；
　　 (4)通過響應面優(yōu)化確定了提高SPG 生長因子的最佳添加量，并優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖12%、酵母粉1%、蛋白胨0.2%、K2

4、HPO4 0.2%、MgSO4·7H2O 0.1%，CMC-Na 0.92%，檸檬酸0.209%，葉酸1.45 mg/L，NAA 0.4 mg/L，此條件下獲得胞外多糖產(chǎn)量為13.37 g/L；
　　 (5)進行了10 L發(fā)酵罐放大發(fā)酵實驗研究，優(yōu)化了發(fā)酵條件：在0.5 m3/h 通氣量、200 rpm轉(zhuǎn)速條件下發(fā)酵120 h，裂褶菌胞外多糖產(chǎn)量為22.09 g/L；
　　 (6)建立了裂褶菌胞外多糖酶促制備活性多糖的技