金地靈芝液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)靈芝多糖條件優(yōu)化及其發(fā)酵產(chǎn)物功能的研究.pdf

1、靈芝是我國(guó)具有悠久歷史的名貴中藥，是一種藥食兩用大型真菌。其中含有多種生物活性成分，以靈芝多糖為代表，能夠治療高血壓、冠心病、肝炎、哮喘等疾病，在醫(yī)療、保健、工業(yè)生產(chǎn)中都有極大意義與價(jià)值。磷脂酶D是一類具有水解和轉(zhuǎn)磷脂活性的磷脂酰膽堿酶，存在于動(dòng)植物及微生物體內(nèi)，主要被應(yīng)用于磷脂改性及稀有磷脂制備，是一種具極大應(yīng)用價(jià)值的酶。利用微生物液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)磷脂酶D，與從動(dòng)植物體內(nèi)分離磷脂酶D相比，具有生長(zhǎng)周期短、易分離提取、酶活高等優(yōu)勢(shì)。

2、　　本試驗(yàn)選擇引自日本的金地靈芝，介于四川地理環(huán)境及氣候條件與日本的差異性，故需對(duì)其培養(yǎng)條件進(jìn)行重新探究。
　　試驗(yàn)以金地靈芝為試材，以發(fā)酵液中靈芝多糖含量為優(yōu)化指標(biāo)，運(yùn)用單因素及響應(yīng)面分析法，對(duì)液態(tài)發(fā)酵的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化;在最優(yōu)條件下，采用水提醇沉提取稱干重，探究發(fā)酵過程中靈芝多糖含量隨時(shí)間的變化，通過鐵氰化鉀還原試驗(yàn)和DPPH自由基清除試驗(yàn)探究發(fā)酵液抗氧化活性隨時(shí)間的變化，分析發(fā)酵液抗氧化活性與發(fā)酵液中靈芝多糖含量的關(guān)

3、系;采用微量肉湯稀釋法，探究靈芝多糖對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、志賀氏菌、白色念珠菌的抑菌效果;利用發(fā)酵液催化卵磷脂與絲氨酸反應(yīng)，通過TLC、HPLC雙重定性檢測(cè)反應(yīng)產(chǎn)物中磷脂酰絲氨酸含量，探究金地靈芝產(chǎn)具轉(zhuǎn)磷脂活性的磷脂酶D的能力。研究結(jié)果如下:
　　1)結(jié)合多糖含量及成本考慮，最優(yōu)培養(yǎng)基配方為:3.98％玉米粉、0.68％蛋白胨、0.21％ MgSO4·7H2O、0.05％ K2HPO4、0.05％ KH2PO4、0

4、.001％維生素B1，優(yōu)化后多糖含量為1.917 g/100mL，比初始培養(yǎng)基時(shí)提高了50.8％;最佳培養(yǎng)條件為:溫度27℃、pH=6、轉(zhuǎn)速150 rpm、接種量10％、發(fā)酵時(shí)間5d，優(yōu)化后多糖含量為2.857 g/100mL，比初始條件下提高了49.5％。
　　2)在連續(xù)發(fā)酵過程中，發(fā)酵5d時(shí)靈芝多糖含量達(dá)到最大，為2.852 g/100mL;7d時(shí)發(fā)酵液還原力達(dá)最強(qiáng)，吸光值為0.520;8d時(shí)發(fā)酵液DPPH清除率達(dá)最高，80.

5、7％;發(fā)酵液抗氧化活性與靈芝多糖含量正相關(guān)性極顯著。
　　3)靈芝多糖對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、志賀氏菌、白色念珠菌的抑菌率均可達(dá)到100％，其MIC值分別為80 mg/mL、120 mg/mL、60 mg/mL、100 mg/mL、140 mg/mL。
　　4)經(jīng)TLC、HPLC雙重定性檢測(cè)，結(jié)果顯示反應(yīng)產(chǎn)物中含有一定量的磷脂酰絲氨酸，表明金地靈芝具有產(chǎn)磷脂酶D的能力。
　　上述研究表明，金地靈芝生長(zhǎng)周期