梨抗黑星病基因的AFLP分子標(biāo)記.pdf

1、梨黑星病(VenturianashicolaTanaketYamamota)是世界性的梨樹重要病害之一，已遍及世界上所有梨產(chǎn)區(qū)。近幾年來，隨著我國梨樹生產(chǎn)的發(fā)展，梨黑星病不斷蔓延，危害逐年加重，成為影響我國梨生產(chǎn)的主要限制因子，因此選育抗病品種是控制病害最經(jīng)濟(jì)、最有效和最安全的方法之一。DNA分子標(biāo)記是隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展出現(xiàn)的一類重要的遺傳標(biāo)記，近年來發(fā)展非常迅速，已在果樹遺傳育種研究的各個(gè)方面得到廣泛的應(yīng)用，但對(duì)梨黑星病分子生物

2、學(xué)方面的研究尚未見報(bào)道。 本研究利用抗病品種新蘋梨為母本，感病品種雪花梨為父本配制的雜交組合，對(duì)其雜交后代進(jìn)行了田間自然感病和棚內(nèi)接種梨黑星病病菌后的抗性調(diào)查，并進(jìn)行了AFLP分子標(biāo)記的研究，建立了用于梨AFLP的分子標(biāo)記體系，基本找到了與梨黑星病抗性基因相關(guān)的分子標(biāo)記，為最終掌握梨黑星病抗性遺傳規(guī)律，梨黑星病抗性育種早期選擇提供了理論依據(jù)。 試驗(yàn)建立了適合梨AFLP分析的技術(shù)體系，以改良CTAB法提取基因組DNA，去除

3、RNA后經(jīng)雙酶切、接頭連接，將連接產(chǎn)物稀釋10倍用引物組合ECORI+0/MseI+C進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增，預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋20倍后用引物組合ECORI+3/MseI+3所組成的64對(duì)引物進(jìn)行選擇性擴(kuò)增，擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性高，適合梨基因組分析。 采用群體分離分析法(BSA法，BulkedSegregantAnalysis)，對(duì)由抗病后代和感病后代組成的抗病和感病兩個(gè)混合基因庫進(jìn)行分析，對(duì)64對(duì)引物組合進(jìn)行篩選，結(jié)果表明引物組合ECORI+