豬myostatin基因不同突變體的功能研究.pdf

1、肌肉生長抑制素（myostatin）是轉(zhuǎn)化生長家族-β（TGF-β）中的一員，對(duì)于肌肉的生長和發(fā)育起負(fù)調(diào)控的作用。在本研究中，我們制備了四種轉(zhuǎn)基因小鼠，即分別表達(dá)豬 myostatin錯(cuò)義突變體（pmMS），C313Y，豬myostatin切割位點(diǎn)的突變體（RSRR），豬myostatin的野生型前肽（ppMS）以及它的突變體形式（D75A）來探究它們對(duì)肌肉生長的影響。而且我們還通過在小鼠體內(nèi)注射豬myostatin的前肽和它的突變體來

2、抑制小鼠內(nèi)源的myostatin，從而探究它們對(duì)于肌肉生長的影響。此外，我們還發(fā)現(xiàn)在pmMS的轉(zhuǎn)基因公鼠中肌肉沒有出現(xiàn)增長，但是在pmMS和ppMS的轉(zhuǎn)基因母鼠以及ppMS的轉(zhuǎn)基因公鼠中肌肉卻出現(xiàn)了增長。為了探索為何在pmMS和ppMS的轉(zhuǎn)基因公鼠中出現(xiàn)肌肉生長的差異，我們對(duì)肌肉中雄激素受體(AR)和它的突變體AR45通過Western blot進(jìn)行了檢測(cè)。所有的研究結(jié)果如下：
　?。?）四種轉(zhuǎn)基因小鼠通過 PCR, RT-PCR

3、, qRT-PCR和 Southern Blot等方法進(jìn)行了鑒定，結(jié)果顯示四種轉(zhuǎn)基因小鼠均制備成功。
　?。?）除了pmMS轉(zhuǎn)基因雄鼠沒有肌肉增多表型，其余的轉(zhuǎn)基因小鼠肌肉均出現(xiàn)了增多表型。注射豬myostatin的前肽和其突變體的小鼠相比于注射PBS的小鼠肌肉也出現(xiàn)了明顯增多。
　?。?）通過AR和AR45的蛋白表達(dá)量計(jì)算兩者灰度值的比例（AR45/AR）得出在pmMS轉(zhuǎn)基因雌鼠和野生型雌鼠之間AR45/AR沒有差異，但是

4、在pmMS雄鼠和野生型雄鼠之間則具有較大的差異。這些數(shù)據(jù)解釋了為何pmMS的轉(zhuǎn)基因雄鼠和雌鼠肌肉生長存在差異。與此同時(shí)，研究結(jié)果顯示AR和AR45的蛋白表達(dá)在ppMS的雄鼠中與pmMS的雄鼠正好相反，這對(duì)于我們的推測(cè)起到支持作用，即在pmMS的雄鼠中高水平的myostatin成熟肽導(dǎo)致AR45蛋白的高表達(dá)、AR的低表達(dá)進(jìn)而補(bǔ)償了由于外源突變myostatin所引起的肌肉增長。
　　總之，這些研究結(jié)果為日后通過人工操控 myosta