突變體hFIX轉(zhuǎn)基因小鼠的研究.pdf

1、該工作構(gòu)建了山羊β-酪蛋白基因啟動(dòng)子指導(dǎo)的高效表達(dá)突變體hFIX的乳腺特異表達(dá)載體,將該載體轉(zhuǎn)染小鼠乳腺上皮細(xì)胞HC-¨并制備轉(zhuǎn)基因小鼠,在細(xì)胞及個(gè)體水平上驗(yàn)證其凝血活性是否比野生型有顯著提高;同時(shí)采用PCR、RT-PCR、定量PCR、Western blot、熒光原位雜交(FISH)、組織切片分析等一系列方法對(duì)外源基因在轉(zhuǎn)基因小鼠中的整合及表達(dá)情況作了詳細(xì)的分析,為今后通過(guò)制備轉(zhuǎn)基因大動(dòng)物來(lái)生產(chǎn)hFIX等藥用蛋白提供了科學(xué)的資料.該工

2、作主要分四部分:一、表達(dá)載體的構(gòu)建二、細(xì)胞水平的研究.三、轉(zhuǎn)基因小鼠的制備和檢測(cè)為.四、外源基因在轉(zhuǎn)基因小鼠中整合及表達(dá)情況的分析綜上所述,該工作在細(xì)胞水平和個(gè)體水平上研究了突變體hFIX的表達(dá)情況.結(jié)果表明:(1)hFIX蛋白當(dāng)其第338位氨基酸由精氨酸突變?yōu)楸彼岷笃淠钚杂休^大程度的提高,使用含有突變體hFIX基因的乳腺特異表達(dá)載體制備的轉(zhuǎn)基因小鼠可以在乳汁中特異高效地表達(dá)具有高凝血活性的hFIX;(2)外源基因的表達(dá)也不會(huì)影響