脂代謝關聯(lián)基因多態(tài)性與高脂血癥風險性研究.pdf

1、背景與目的：
　　高脂血癥是指人體內(nèi)血漿脂質(zhì)代謝異常，包括血漿總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平升高以及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平降低。高脂血癥是人群中的一種常見病和多發(fā)病,大量的臨床流行病學調(diào)查結(jié)果表明，高血脂是高血壓、2型糖尿病、腦卒中、動脈粥樣硬化和冠心病等多種慢性非傳染性疾病的重要危險因素。
　　血脂水平與年齡、性別、職業(yè)、文化程度、經(jīng)濟條件以及不同地域的人群的生活飲食

2、習慣等諸多因素密切相關。調(diào)查發(fā)現(xiàn)我國居民的血脂水平存在明顯的地區(qū)性差異，并且總體低于西方人群的水平。血脂水平除受到環(huán)境因素影響外，還與個體的遺傳因素有關,研究認為高脂血癥是一種由遺傳和環(huán)境危險因素共同作用的多基因性疾病。目前認為環(huán)境因素是大多數(shù)疾病發(fā)生的始動因素，而個人的遺傳特征決定疾病的易感性。單核苷酸點突變造成的基因多態(tài)性（SNP）是易感性的遺傳基礎，因此對于基因的SNP篩查和研究具有重要的理論及應用價值。隨著單核苷酸多態(tài)性單體型圖

3、譜（HapMap）計劃的完成和基因芯片技術的發(fā)展，大大促進了應用全基因組關聯(lián)性研究(GWAS)的方法篩查與疾病相關SNP的發(fā)展。由于GWAS研究的樣本代表性問題，所獲得的疾病關聯(lián)性位點的結(jié)果尚需在不同人群中進行多中心的重復驗證。為了解血脂代謝相關基因的變異對血脂水平的影響以及在發(fā)病機制方面提供更多的線索，我們重點對影響血脂代謝的相關基因進行了檢索，選擇在GWAS結(jié)果中與血漿TG及LDL-C關聯(lián)的標簽SNP，并且次要等位基因頻率大于5％，

4、尚未在東亞人群中驗證的SNP來進行研究。根據(jù)SNP檢測操作平臺對突變類型的要求，確定了12個SNPs位點，涉及8個基因或基因簇。
　　潮汕地處沿海，當?shù)鼐用耖L期以來有著自己獨特的傳統(tǒng)風俗文化及生活飲食習慣。根據(jù)我們4年來的人群慢性病監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，所監(jiān)測人群中30歲以上的居民血脂異常率高達40%以上，已成為危害當?shù)厝巳航】档臐撛谕{。本研究以潮汕人群為研究對象，采用病例-對照的研究方法，對選取的12個SNPs位點采用高通量快速分型的方法

5、，篩查SNPs單核苷酸的突變頻率，描述各基因型在高脂血癥患者及對照人群中的分布，闡述各等位基因、基因型、基因-基因以及基因-環(huán)境之間的交互作用對該人群高脂血癥患病的風險性。通過篩查脂代謝相關基因的SNPs，尋找有效的治療靶點，并針對易感人群制定合適的防治教育模式，及早對疾病進行有效的預防和控制。
　　對象和方法：
　　采用整群抽樣的方法，抽取2010年5月至2011年9月在潮南民生醫(yī)院和汕頭大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院體檢中心單位

6、集體體檢的居民作為研究對象。所有對象年齡18周歲以上，在潮汕地區(qū)常住5年及以上，漢族，且自愿參加調(diào)查且能夠合作者。
　　采用現(xiàn)場流行病學調(diào)查方法，經(jīng)本人同意后，由經(jīng)過訓練的調(diào)查人員對調(diào)查對象逐一進行體格檢查、問卷調(diào)查和生化檢查。采用成組病例-對照研究方法，依據(jù)《2007年中國血脂防治指南》規(guī)定的血脂異常診斷標準入選高脂血癥的個體作為病例組，同時選取同期體檢的同一單位血脂正常且無服用降血脂藥史的個體作為對照組。獲得高脂血癥（HLP）

7、患者共1514例，其中男性1166人，女性348人，平均年齡44.7±11.8歲。HLP中，高甘油三酯(HTG)患者825例，高低密度脂蛋白(H-LDL)患者792例。血脂四項均正常的對象為對照組，共1073例，其中男性708人，女性365人，平均年齡為38.4±10.6歲。
　　樣本DNA提取采用酚氯仿方法抽提，采用GenomeLabTM SNPstream單核苷酸多態(tài)性分型系統(tǒng)進行基因分型。數(shù)據(jù)經(jīng)錄入核查后，運用SPSS13.

8、0和SAS9.1軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料采用(X±SD)進行統(tǒng)計描述，正態(tài)性檢驗采用單樣本K-S擬合優(yōu)度法。病例-對照研究中兩組均數(shù)的比較采用 t檢驗；計數(shù)資料采用率進行統(tǒng)計描述，單個位點等位基因和基因型與表型的統(tǒng)計推斷采用χ2檢驗。采用 SHEsis在線軟件分析基因型頻率分布的Hardy-Weinberg平衡。采用 Haploview4.0軟件對同一基因內(nèi)的不同位點間進行連鎖不平衡分析。應用Plink軟件建立二分類非條件Logist

9、ic回歸模型研究等位基因、基因型以及基因型的顯性模型和隱性模型與血脂異常的關系，檢驗水準取?=0.05/12=0.0042。采用多因子降維法(GMDR)分析基因-基因以及基因-環(huán)境之間的交互作用，顯著性檢驗水準取α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.除血漿HDL外，血脂異常人群中各項體格檢查指標及生化指標均值均高于正常人群相應指標均值(P<0.05)。
　　2.12個SNPs位點均被成功分型，平均分型成功率為99.68%

10、。對照組樣本中12個SNPs的基因型頻率分布全部符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。
　　3. APOA1/C3/A4/A5 rs1558861的次要等位基因、雜合子和次要等位基因純合子以及FADS1/2/3 rs174547位點次要等位基因純合子均分別有較高的HTG、H-LDL和HLP患病風險，而HMGCR rs12916位點的雜合子、APOA1/C3/A4/A5 rs4938303的次要等位基因的純合子的風險

11、較低。LPL rs326的次要等位基因HTG的患病風險較低，該位點的次要等位基因純合子和雜合子 HLP的患病風險較低。APOA1/C3/A4/A5 rs4938303位點、PSRC1/CELSR2/SORT1 rs599839位點和HMGCR rs3846662位點的次要等位基因的H-LDL的風險較低。
　　4. HMGCR基因內(nèi)的單倍型G-T-C的H-LDL風險較高；單倍型A-C-C的H-LDL和HLP風險較低。FADS1/2/

12、3基因簇的單倍型C-T以及APOA1/C3/A4/A5基因簇的單倍型C-C的HTG、H-LDL和HLP風險較高，而另外的單倍型 C-C及 T-T的風險較低。APOA1/C3/A4/A5基因簇的單倍型T-C的HTG風險較低。
　　5．APOA1/C3/A4/A5 rs1558861位點的基因型為CC與APOE rs157580位點的基因型為AA+AG時，HTG的患病風險最高(OR=5.6，P<0.001)。rs1558861位點的基

13、因型為CC，而FADS1/2/3 rs174547位點的基因型為 TT時，H-LDL和HLP的患病風險最高(OR=11.3， P=0.047；OR=11.8，P=0.002)。
　　6. HTG組中，rs174570、rs11206510、rs4938303、rs157580、rs12916、rs599839、rs714052和rs326八個位點分別與肉類攝入，rs174547和rs1558861分別與坐位時間，rs3846662

14、和rs3846663分別與淡水魚攝入存在交互作用。H-LDL組中，rs174547、rs11206510、rs4938303、rs1558861、rs157580和rs326六個位點分別與高血壓，rs12916和rs714052分別與坐位時間，rs3846662和rs3846663分別與飲茶之間存在交互作用。
　　結(jié)論：
　　1.12個來自 GWAS血脂關聯(lián)的標簽 SNPs中，發(fā)現(xiàn)有7個在潮汕人群中與HTG和H-LDL存在相

15、關性。
　　2. rs1558861、rs174547和rs4938303位點與HTG、H-LDL和HLP相關。rs326位點HTG和HLP相關；rs12916位點與H-LDL和HLP相關。 rs3846662和rs599839位點與H-LDL相關。
　　3. HMGCR基因內(nèi)單倍型G-T-C和A-C-C，APOA1/C3/A4/A5基因簇的單倍型C-C和T-T，F(xiàn)ADS1/2/3基因簇單倍型C-T和C-C均與HTG、H-L