大字杜鵑核型分析及種質(zhì)資源遺傳多樣性研究.pdf

1、大字杜鵑(Rhododendron schlippenbachin Maxim.)杜鵑亞屬，野生種。其植株展枝優(yōu)美，花大色艷，為較好的觀(guān)姿、觀(guān)花植物，大字杜鵑在吉林省僅分布在琿春市境內(nèi)，數(shù)量十分稀少。本研究對(duì)大字杜鵑進(jìn)行了細(xì)胞學(xué)研究，為揭示其種間關(guān)系、起源和演化提供必要的資料；同時(shí)利用RAPD技術(shù)對(duì)大字杜鵑群體間和群體內(nèi)進(jìn)行遺傳多樣性的分析及親緣關(guān)系的鑒定，旨在進(jìn)一步建立大字杜鵑核心種質(zhì)以及更好地利用其資源奠定基礎(chǔ)，為我國(guó)大字杜鵑育種工

2、作提供參考。研究結(jié)果如下：
　　1、通過(guò)對(duì)大字杜鵑進(jìn)行核型分析得到大字杜鵑體細(xì)胞染色體數(shù)2n=28，染色體基數(shù)n=14，染色體核型公式為2n=2x=28=12m+16sm，核型為2B，臂比變幅為1.08～2.59，相對(duì)長(zhǎng)度變幅在10.44％～4.40%，著絲點(diǎn)指數(shù)變幅為27.84%～48.51%，平均值為38.13%，核型不對(duì)稱(chēng)系數(shù)為61.17%。
　　2、以改進(jìn)的CTAB法提取大字杜鵑葉片基因組DNA，分別研究了模板DNA

3、濃度，引物濃度，dNTP濃度，TaqDNA聚合酶量及鎂離子濃度等因素對(duì)大字杜鵑RAPD反應(yīng)結(jié)果的影響。通過(guò)對(duì)各因子的組合比較，建立了大字杜鵑RAPD反應(yīng)的優(yōu)化體系，即總反應(yīng)體積為25μL，其中包括10×Taq酶配套緩沖液2.5μL，模板DNA濃度為50ng/μL，引物濃度為0.5μmol/L，dNTP濃度為0.15mmol/L，TaqDNA聚合酶為1U，Mg2+濃度為2.0mmol/L，其余用重蒸餾水補(bǔ)足。擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性5min

4、，94℃變性1min，38℃退火40s，72℃延伸2min，共41個(gè)循環(huán)，72℃延伸7min。
　　3、采用RAPD技術(shù)對(duì)大字杜鵑6個(gè)天然群體進(jìn)行了遺傳多樣性分析，從160個(gè)隨機(jī)引物中篩選出了重復(fù)性好、有豐富多態(tài)性的8個(gè)引物，共產(chǎn)生176條帶，其中多態(tài)性帶153條，占86.93%。根據(jù)RAPD二元數(shù)據(jù)結(jié)果，計(jì)算出了6個(gè)群體間的遺傳距離和相似系數(shù)，并根據(jù)UPGMA法進(jìn)行了聚類(lèi)分析，建立了6個(gè)大字杜鵑群體間的聚類(lèi)分析樹(shù)狀圖。結(jié)果表明:

5、6個(gè)大字杜鵑群體可以分成3類(lèi)，第1類(lèi)為中國(guó)延邊琿春敬信北坡和敬信南坡，第2類(lèi)為朝鮮琵琶島北山、牡蠣泡和澤思嶺，第3類(lèi)為朝鮮琵琶島海邊，初步鑒定了大字杜鵑不同種群之間的親緣關(guān)系。
　　4、采用RAPD技術(shù)對(duì)延邊州琿春敬信南坡大字杜鵑群體內(nèi)23個(gè)個(gè)體進(jìn)行了遺傳多樣性分析，篩選出了5個(gè)引物，共產(chǎn)生73條帶，其中多態(tài)性帶68條，占93.15%。根據(jù) RAPD二元數(shù)據(jù)結(jié)果，計(jì)算出了23個(gè)個(gè)體間的遺傳距離和相似系數(shù)，根據(jù)UPGMA方法進(jìn)行聚類(lèi)