大字杜鵑核型分析及種質資源遺傳多樣性研究.pdf

1、大字杜鵑(Rhododendron schlippenbachin Maxim.)杜鵑亞屬，野生種。其植株展枝優(yōu)美，花大色艷，為較好的觀姿、觀花植物，大字杜鵑在吉林省僅分布在琿春市境內，數(shù)量十分稀少。本研究對大字杜鵑進行了細胞學研究，為揭示其種間關系、起源和演化提供必要的資料；同時利用RAPD技術對大字杜鵑群體間和群體內進行遺傳多樣性的分析及親緣關系的鑒定，旨在進一步建立大字杜鵑核心種質以及更好地利用其資源奠定基礎，為我國大字杜鵑育種工

2、作提供參考。研究結果如下：
　　1、通過對大字杜鵑進行核型分析得到大字杜鵑體細胞染色體數(shù)2n=28，染色體基數(shù)n=14，染色體核型公式為2n=2x=28=12m+16sm，核型為2B，臂比變幅為1.08～2.59，相對長度變幅在10.44％～4.40%，著絲點指數(shù)變幅為27.84%～48.51%，平均值為38.13%，核型不對稱系數(shù)為61.17%。
　　2、以改進的CTAB法提取大字杜鵑葉片基因組DNA，分別研究了模板DNA

3、濃度，引物濃度，dNTP濃度，TaqDNA聚合酶量及鎂離子濃度等因素對大字杜鵑RAPD反應結果的影響。通過對各因子的組合比較，建立了大字杜鵑RAPD反應的優(yōu)化體系，即總反應體積為25μL，其中包括10×Taq酶配套緩沖液2.5μL，模板DNA濃度為50ng/μL，引物濃度為0.5μmol/L，dNTP濃度為0.15mmol/L，TaqDNA聚合酶為1U，Mg2+濃度為2.0mmol/L，其余用重蒸餾水補足。擴增程序為94℃預變性5min

4、，94℃變性1min，38℃退火40s，72℃延伸2min，共41個循環(huán)，72℃延伸7min。
　　3、采用RAPD技術對大字杜鵑6個天然群體進行了遺傳多樣性分析，從160個隨機引物中篩選出了重復性好、有豐富多態(tài)性的8個引物，共產生176條帶，其中多態(tài)性帶153條，占86.93%。根據(jù)RAPD二元數(shù)據(jù)結果，計算出了6個群體間的遺傳距離和相似系數(shù)，并根據(jù)UPGMA法進行了聚類分析，建立了6個大字杜鵑群體間的聚類分析樹狀圖。結果表明:

5、6個大字杜鵑群體可以分成3類，第1類為中國延邊琿春敬信北坡和敬信南坡，第2類為朝鮮琵琶島北山、牡蠣泡和澤思嶺，第3類為朝鮮琵琶島海邊，初步鑒定了大字杜鵑不同種群之間的親緣關系。
　　4、采用RAPD技術對延邊州琿春敬信南坡大字杜鵑群體內23個個體進行了遺傳多樣性分析，篩選出了5個引物，共產生73條帶，其中多態(tài)性帶68條，占93.15%。根據(jù) RAPD二元數(shù)據(jù)結果，計算出了23個個體間的遺傳距離和相似系數(shù)，根據(jù)UPGMA方法進行聚類