斑痣盤(pán)菌目莖生種的分類(lèi)及針葉樹(shù)生散斑殼屬分子生物學(xué)研究.pdf

1、斑痣盤(pán)菌目(Rhytismatales)是世界菌物資源中的一個(gè)重要組成部分。本文采用現(xiàn)代菌物學(xué)技術(shù),從形態(tài)解剖學(xué)、個(gè)體發(fā)育學(xué)、生態(tài)與地理分布等方面對(duì)斑痣盤(pán)菌目部分莖生種進(jìn)行了較深入的分類(lèi)研究。同時(shí),采用10個(gè)重復(fù)性好的隨機(jī)引物對(duì)針葉樹(shù)生散斑殼屬(Lophodermium Chevall.)的22個(gè)菌株進(jìn)行ISSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng),通過(guò)ISSR分析結(jié)果結(jié)合表型性狀的比較和分析,進(jìn)一步明確了針葉樹(shù)生散斑殼屬若干種內(nèi)和種間的親緣關(guān)系。主要研究

2、結(jié)果如下： 1.以Darker(1967)、Cannon & Minter (1986)、Kirk et al. (2001)等人提出的分類(lèi)觀點(diǎn)為主要依據(jù),對(duì)采自安徽天堂寨國(guó)家森林公園、黃山風(fēng)景區(qū)以及保藏于安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)森保教研室(AAUFP)的標(biāo)本進(jìn)行鑒定、分類(lèi)。研究了異盤(pán)菌屬(Ascodichaena)的多皺異盤(pán)菌(A. rugosa),散斑殼屬(Lophodermium)的葛藤散斑殼(L. puerariae)、莖生散斑殼(

3、L. caulinum)、茶生散斑殼(L. camelliicola)、三尖杉散斑殼(L. cephalotaxi),齒裂菌屬(Coccomyces)的小齒裂菌(C. leptideus)、臺(tái)灣齒裂菌(C. taiwanensis),以及皮下盤(pán)菌屬(Hypoderma)的野珠蘭皮下盤(pán)菌(H。stephanandrae)8個(gè)種,其中多皺異野盤(pán)菌為中國(guó)新紀(jì)錄科、屬、種,葛藤散斑殼和莖生散斑殼為新種。編制了二叉式分種檢索表,各種均附有形態(tài)解剖

4、學(xué)特征的描述與圖解以及寄主、生境的記載,并加以討論。 2.利用改良的氯化芐法對(duì)22個(gè)針葉樹(shù)生散斑殼屬(Lophodermium)菌株進(jìn)行DNA提取。通過(guò)對(duì)模板DNA濃度、引物濃度、Mg2+濃度、dNTPs濃度、Taq DNA聚合酶濃度以及退火溫度等條件進(jìn)行優(yōu)化,建立了該類(lèi)菌物ISSR-PCR反應(yīng)的最佳體系,即在15μl反應(yīng)體積中,DNA模板(45ng/μl)2.0μl,隨機(jī)引物(10μM)0.6μl,MgCl2(25mM)1.5

5、μl,dNTPs(10mM)0.3μl,Taq酶(5U/μl)0.3μl,10×PCR buffer1.5μl,ddH2O 8.8μl。利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)源于安徽黃山風(fēng)景區(qū)以及天堂寨國(guó)家森林公園的22個(gè)針葉樹(shù)生散斑殼屬菌株進(jìn)行了基因組親緣關(guān)系的分析。采用篩選出的10個(gè)隨機(jī)引物,通過(guò)ISSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng),共獲得擴(kuò)增條帶167條,其中特異性條帶160條,占95.8％；通過(guò)歐氏最短距離中的類(lèi)平均法聚類(lèi),得到各菌株之間的遺傳距離在5