重癥急性胰腺炎動(dòng)物模型中內(nèi)皮素受體拮抗劑對(duì)P-選擇素和E-選擇素表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的：重癥急性胰腺炎(SAP)的發(fā)生機(jī)制十分復(fù)雜，現(xiàn)在比較公認(rèn)的有以下幾大學(xué)說(shuō)：1.胰酶消化學(xué)說(shuō)；2.細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)學(xué)說(shuō)；3.微循環(huán)障礙；4.感染-第二次打擊學(xué)說(shuō)；5.白細(xì)胞過(guò)度激活學(xué)說(shuō)。各種致病因素造成胰腺組織和細(xì)胞損傷，引起胰酶激活消化自身組織、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)而釋放大量炎癥介質(zhì)。其中血管活性因子導(dǎo)致微循環(huán)障礙加重局部組織損害，而血小板活化因子使腸壁通透性增加，上皮屏障功能喪失，使腸道內(nèi)細(xì)菌移位至腸系膜淋巴結(jié)、腹腔、血循環(huán)中，

2、加上細(xì)胞免疫功能的下降而發(fā)生內(nèi)毒素血癥。內(nèi)毒素血癥刺激巨噬細(xì)胞釋放而引起高細(xì)胞因子血癥，并使白細(xì)胞受趨化因子的吸引、粘附分子的介導(dǎo)下發(fā)生滲出與在器官的集聚，隨后釋放大量的酸性水解酶、彈力蛋白酶、各種氧自由基損害組織造成多器官功能衰竭。由此可見(jiàn)，抑制白細(xì)胞集聚與過(guò)度激活在治療SAP中有著重要意義?，F(xiàn)研究證實(shí)內(nèi)皮素不僅是致SAP微循環(huán)障礙的重要因子，而且與白細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥有關(guān)聯(lián)。其受體拮抗劑不僅可以糾正血流動(dòng)力學(xué)改變、穩(wěn)定毛細(xì)血管通透性和增

3、加胰腺功能性毛細(xì)血管密度，而且可抑制白細(xì)胞滾動(dòng)，但后者具體機(jī)制不清。白細(xì)胞滾動(dòng)是白細(xì)胞滲出的前提，從理論上講抑制了白細(xì)胞滾動(dòng)就可減少白細(xì)胞滲出與集聚。由于白細(xì)胞滾動(dòng)受血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)的P-選擇素和E-選擇素(selectin)所介導(dǎo)，因此本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建SAP動(dòng)物模型，研究?jī)?nèi)皮素受體拮抗劑(ET-RA)對(duì)P-selectin和E-selecitn表達(dá)的影響，從而探討ET-RA抑制白細(xì)胞滾動(dòng)的意義及相關(guān)機(jī)制，并為ET-RA進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)提供更

4、有力的理論基礎(chǔ)與依據(jù)。 方法：①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為：正常對(duì)照組；SAP組；SAP+BQ123組(BQ123是一種特異性內(nèi)皮素A型受體拈抗劑)。后兩組又各分為24h、48h、72h、1周時(shí)段組；②采用胰腺實(shí)質(zhì)內(nèi)注射牛磺膽酸鈉方法制作SAP動(dòng)物模型，利用BQ123對(duì)模型進(jìn)行干預(yù)；③利用血清淀粉酶、脂肪酶和光鏡下組織病理學(xué)改變對(duì)SAP模型進(jìn)行評(píng)價(jià)；④光鏡下觀察各組胰腺的白細(xì)胞浸潤(rùn)情況；⑤利用免疫組化SP方法檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上P-sel

5、ectin、E-selectin表達(dá)水平；⑥利用RT-PCR的方法測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)P-selectin、E-selectinmRNA生成水平。 結(jié)果：①利用胰腺實(shí)質(zhì)注射牛磺膽酸鈉的方法，復(fù)制了SAP的大鼠模型，經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)與組織學(xué)觀察證實(shí)模型符合SAP診斷標(biāo)準(zhǔn)；②SAP+BQ123組組織損害與白細(xì)胞浸潤(rùn)較SAP組明顯減輕，淀粉酶與脂肪酶明顯下降(P＜0.01)；③通過(guò)RT-PCR、免疫組織化學(xué)法觀察到，正常胰腺血管內(nèi)皮細(xì)胞無(wú)sel

6、ectin表達(dá)，而SAP組24小時(shí)P-selectin即呈現(xiàn)較強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，而E-selectin呈弱陽(yáng)性表達(dá)，在48小時(shí)二者表達(dá)達(dá)到高峰，之后P-selectin表達(dá)水平緩慢下降，而E-selectin迅速下降。1周后P-selectin在胰腺仍呈較強(qiáng)表達(dá)，而E-selectin表達(dá)減弱甚至呈現(xiàn)陰性表達(dá)。SAP+BQ123組較SAP組可見(jiàn)selectin表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。 結(jié)論：①P-selectin與SAP長(zhǎng)期維持炎癥