重組人生長激素皮下注射對大鼠隨意皮瓣成活影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本研究探討在大鼠背部制作隨意皮瓣,觀察在其皮下局部注射rhGH對防止皮瓣遠(yuǎn)端缺血壞死的有效性,探討rhGH對皮瓣下血管形成的調(diào)節(jié)作用,為深入了解rhGH在皮瓣成活過程中的作用及其臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:選用24只Wistar大鼠(由南華大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供),雌雄不拘,體重150-200g.2月齡余。隨機(jī)分成A、B兩組,A組(rhGH治療組)12只,B組(對照組)12只。將大鼠用2％的戊巴比妥鈉(0.2ml/100g

2、)腹腔注射麻醉后,在其背部形成1.5cm×6cm的隨意皮瓣,切開皮瓣邊緣并掀起皮瓣后,A組于皮瓣遠(yuǎn)蒂端5cm處皮瓣深筋膜下注射含rhGH0.1IU/kg溶液0.25ml,注射范圍為距蒂端4~6cm區(qū)域,B組于皮瓣遠(yuǎn)蒂端5cm處皮瓣深筋膜下注射0.25ml注射用生理鹽水,注射范圍為距蒂端4~6cm區(qū)域,給藥完畢后立即原位縫合,術(shù)后第7天將動(dòng)物處死,分別測量皮瓣成活面積和計(jì)算成活率;并分別在兩組皮瓣的中段(距蒂2~4cm)的成活區(qū),兩組皮瓣

3、遠(yuǎn)端(距蒂4~6cm)的壞死區(qū)及皮瓣遠(yuǎn)端的成活區(qū)分別切取組織標(biāo)本。組織經(jīng)10%甲醛固定后,常規(guī)脫水、透明、浸蠟,石蠟包埋,切片。VEGF、FLT-1蛋白檢測采用SP免疫組化方法、結(jié)果經(jīng)采用Leica Q500MC顯微圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行電腦圖像分析后,做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果：
　　1.大體觀察肉眼觀察成活皮瓣表現(xiàn)為質(zhì)地柔軟、紅潤,針刺時(shí)出血;壞死的皮瓣質(zhì)硬、黑色,針刺時(shí)不出血。術(shù)后第7天,與對照組相比較, rhGH實(shí)驗(yàn)組的皮瓣

4、壞死面積較小,組織水腫較輕。位于皮瓣遠(yuǎn)端。對照組(見照片6):皮瓣壞死嚴(yán)重,表面發(fā)黑、質(zhì)硬,毛稀疏脫落,壞死皮瓣呈蠟黃色,組織水腫嚴(yán)重。
　　2.皮瓣存活面積及成活率檢測術(shù)后第7天,實(shí)驗(yàn)組及對照組的皮瓣存活面積分別為7.31±0.13cm2和4.53±0.08 cm2,實(shí)驗(yàn)組皮瓣最大及最小存活面積分別為9cm2及6.42cm2,對照組皮瓣最大及最小存活面積分別為5.88cm2及4.46cm2;實(shí)驗(yàn)組與對照組皮瓣平均存活率分別為(8

5、1.72±4.57)%及(48.35±1.06)%。
　　3.病理組織學(xué)檢查HE染色可見:所有皮瓣壞死區(qū)均表現(xiàn)為急性炎癥,中性白細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤,90%的肉膜層表現(xiàn)為肌變性壞死。rhGH實(shí)驗(yàn)組皮瓣成活區(qū)可見大量新生血管形成,對照組成活區(qū)新生血管的形成明顯低于rhGH處理組,肉膜層表現(xiàn)為有限的肌壞死和炎癥浸潤,在肉膜層以上有較少的血管。
　　4.VEGF蛋白及FLT-1檢測術(shù)后第7天,(1)VEGF免疫組化染色可見在rhGH

6、實(shí)驗(yàn)組的中段皮瓣分布較多的棕黃色顆粒;而在對照組中段皮瓣VEGF免疫陽性細(xì)胞分布稀疏。(2)VEGF免疫熒光染色可見rhGH實(shí)驗(yàn)組中段皮瓣紅色顆粒分布密集,在皮瓣的表皮、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和毛囊汗腺的上皮細(xì)胞均有較強(qiáng)的陽性表達(dá);而在對照組中段皮瓣,其分布稀疏,在上述部位陽性表達(dá)較弱。(3)VEGF受體免疫熒光染色可見rhGH實(shí)驗(yàn)組紅色顆粒分布密集,陽性表達(dá)多見于真皮及真皮下組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞,單個(gè)或已成腔的微小血管內(nèi)皮細(xì)胞較多見;

7、對照組可見紅色顆粒分布稀疏,真皮及真皮下組織陽性表達(dá)的內(nèi)皮細(xì)胞,但單個(gè)或已成腔的微小血管內(nèi)皮細(xì)胞較少見。
　　5.血管密度檢測在術(shù)后第7天皮瓣中段的血管密度rhGH實(shí)驗(yàn)組與對照組分別為28.65±5.41個(gè)/mm2和19.87±4.81個(gè)/mm2,兩組對比有差異,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　rhGH局部皮下注射可明顯降低大鼠背部隨意超長皮瓣壞死率,促進(jìn)皮瓣成活?？赡苁蛊ぐ曛卸谓M織內(nèi)VEGF及