重組人生長(zhǎng)激素對(duì)大鼠腹部游離皮瓣成活影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 探討局部注射重組人生長(zhǎng)激素對(duì)大鼠腹部游離皮瓣對(duì)皮瓣存活的影響，探討rhGH對(duì)皮瓣下血管形成的調(diào)節(jié)作用，為深入了解rhGH在皮瓣成活過(guò)程中的作用及其臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。 方法： 選取Wistar大鼠20只，雌雄不拘，體重350～400 g。將動(dòng)物隨機(jī)分為rhGH組和生理鹽水組，每組10只。于大鼠腹部正中設(shè)計(jì)雙側(cè)腹壁下動(dòng)靜脈為蒂的聯(lián)合軸型皮瓣，皮瓣兩側(cè)位于腋前線，上界位于胸前，皮瓣下界位于恥骨上方。于皮瓣右

2、側(cè)部分（結(jié)扎血管側(cè)）設(shè)計(jì)兩排共10個(gè)注射點(diǎn)，rhGH組注射劑量為rhGH0．1 IU/kg，用生理鹽水稀釋至總量為1 ml，用微量注射器（臨床皮試用1 ml微量注射器）分別給予每個(gè)注射點(diǎn)在皮深筋膜下注入0．1ml，間隔1cm。同理，生理鹽水組注射生理鹽水，方法及劑量相同于rhGH組；按設(shè)計(jì)用刀沿畫(huà)線切開(kāi)皮瓣遠(yuǎn)端達(dá)深筋膜淺層，先分別游離出雙側(cè)腹壁下動(dòng)靜脈，再在深筋膜與肌膜間作切開(kāi)分離，然后掀起皮瓣，結(jié)扎并切斷右側(cè)腹壁下動(dòng)靜脈，將左側(cè)腹壁下

3、動(dòng)靜脈標(biāo)記后切斷，形成左腹壁下動(dòng)靜脈的大型游離皮瓣，皮瓣原位用4-0絲線間斷縫合，保證皮膚對(duì)合良好，留下皮瓣左下方皮膚暫不縫合留做吻合血管使用，用11-0無(wú)損傷縫合線吻合血管，先吻合靜脈，再吻合動(dòng)脈，吻合好動(dòng)脈后松開(kāi)血管夾，見(jiàn)血管有血流通過(guò)，皮瓣顏色逐步紅潤(rùn)，再縫合左下方皮膚，用紅霉菌軟膏涂抹創(chuàng)緣。術(shù)后觀察皮瓣成活及壞死情況，分別于術(shù)后第7天測(cè)量?jī)山M皮瓣成活面積，計(jì)算皮瓣成活百分率；于第14天在成活區(qū)與壞死區(qū)交界處切取標(biāo)本，做常規(guī)HE染

4、色觀察組織形態(tài)變化，于光鏡下觀察組織新生血管、肉芽組織增生等情況。再做免疫組化（SP法）分析血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的表達(dá)及微血管密度（MVD）的檢測(cè)。結(jié)果經(jīng)采用Leica Q500MC顯微圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行電腦圖像分析，用SPSS12．0建立數(shù)據(jù)庫(kù)并對(duì)結(jié)果進(jìn)行方差分析。 結(jié)果： 1．大體觀察術(shù)后第7天觀察，rhGH組的皮瓣壞死面積較生理鹽水組小，生理鹽水組皮瓣較實(shí)驗(yàn)組壞死嚴(yán)重，壞死部分位于皮瓣遠(yuǎn)端偏右側(cè)；術(shù)后14天，皮瓣成活

5、部分與壞死部分界限清楚，成活皮瓣收縮明顯，部分壞死皮瓣硬痂已與基底創(chuàng)面分離脫落，基底為肉芽創(chuàng)面，生理鹽水組皮瓣創(chuàng)面水腫、炎性滲出較rhGH組嚴(yán)重。 2．皮瓣存活面積及成活率檢測(cè)術(shù)后第7天，rhGH組及生理鹽水組的皮瓣存活面積分別為47．65±3．93 c㎡和29．97±2．89 c㎡，rhGH組皮瓣最大及最小存活面積分別為52．38 c㎡及39．64 c㎡，生理鹽水組皮瓣最大及最小存活面積分別為36．51 c㎡及26．39 c㎡

6、；rhGH組與生理鹽水組皮瓣平均存活率分別為84．00±4．96%及52．40±5．99%。rhGH組皮瓣成活面積百分比明顯高于生理鹽水組，兩組有顯著性差異，p<0．05。 3．病理組織學(xué)檢查 rhGH組皮瓣成活區(qū)可見(jiàn)大量新生血管形成，生理鹽水組成活區(qū)新生血管的形成明顯低于rhGH組。 4．VEGF蛋白檢測(cè)標(biāo)本VEGF免疫組化染色可見(jiàn)在rhGH組的皮瓣分布較多棕黃色顆粒的VEGF免疫陽(yáng)性細(xì)胞；而在生理鹽水組VEGF免疫陽(yáng)