山藥種質資源離體保存技術的研究.pdf

1、本文對山藥種質資源的分步冷凍法和玻璃化法超低溫保存技術進行了系統(tǒng)的研究。結果表明：(1)分步冷凍法超低溫保存的最佳技術體系為：繼代培養(yǎng)60d的試管苗于4℃低溫下鍛煉7d，然后切取1～1.5cm帶芽的幼嫩莖段放入MS+10％DMSO的預培養(yǎng)基中預培養(yǎng)7d，以10％DMSO+5％M+5％PVP作冰凍保護劑，在0℃低溫下對帶芽莖段處理2h，然后在-20℃、-80℃下各處理2h，最后投入液氮保存，保存一定時間后，將材料取出，在37℃水浴中快速化

2、凍，化凍后用MS+5％S的洗滌液洗滌4次，每次10min，后轉入繼代培養(yǎng)基MS+KT2mg·L-1+NAA0.02mg·L-1上，先于暗處培養(yǎng)14d，再轉為光培養(yǎng)，即可再生出完整的新植株，再生苗與常溫苗形態(tài)指標和生理生化指標差異不大。山藥超低溫保存的成活率隨基因型而異，表現(xiàn)出明顯的差異性，其中，B號山藥的相對存活率和成活率最高，達84.96％和66.95％，南城的相對存活率和成活率最低，僅為29.09％和19.80％；(2)玻璃化法超低

3、溫保存的最佳技術體系為：繼代培養(yǎng)60d的試管苗于4℃低溫下鍛煉7d，然后切取1～1.5cm帶芽的幼嫩莖段放入MS+10％DMSO的預培養(yǎng)基中預培養(yǎng)7d，莖段預培養(yǎng)后先用60％PVS1在0℃下過渡60min，再用100％PVS1在0℃下脫水60min，最后投入液氮保存，保存一定時間后，將材料取出，在37℃水浴中快速化凍，化凍后用MS+7％S的洗滌液洗滌4次，每次10min，后轉入繼代培養(yǎng)基MS+KT2mg·L-1+NAA0.02mg·L-