2型糖尿病大鼠血清可溶性E-選擇素的變化及意義.pdf

1、目的：本試驗(yàn)旨在通過復(fù)制2型糖尿病大鼠模型，測(cè)定大鼠可溶性E-選擇素、糖化血紅蛋白、空腹血糖的數(shù)值，了解三者的動(dòng)態(tài)變化，探討E-選擇素與糖化血紅蛋白、血糖之間的關(guān)系及E-選擇素在糖尿病血管性并發(fā)癥發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制，為糖尿病血管性并發(fā)癥的預(yù)防和治療提供新思路。 方法：健康7周齡清潔級(jí)近交系wistar大鼠120只，體重180-220g，雌雄各半，購進(jìn)后適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，大鼠隨機(jī)分為2組：正常對(duì)照組(control group,

2、CON)50只，實(shí)驗(yàn)組(trialgroup,TRI)70只，各組大鼠均為雌雄各半。正常對(duì)照組大鼠喂以普通飼料，實(shí)驗(yàn)組大鼠喂以高熱量飼料。4周后，將兩組大鼠同時(shí)禁食8小時(shí)，然后實(shí)驗(yàn)組大鼠小劑量(30mg/kg)腹腔注射1％鏈脲佐菌素(溶于0.1mmol/1檸檬酸鈉緩沖液,pH4.4)；正常對(duì)照組大鼠腹腔注射等量檸檬酸鈉緩沖液(0.1mmol/1,pH4.4)。1周后所有大鼠做口服葡萄糖耐量試驗(yàn)：取FBG≥7.0mmol/1和(或)2hB

3、G≥11.1mmol/1者為造模成功。TRI組共有61只造模成功，成模率87.1％。從中隨機(jī)選取50只，雌雄各半，納入正式實(shí)驗(yàn)，為糖尿病組(DMgroup,DM)。入組大鼠每2周尾靜脈血測(cè)一次空腹血糖和體重(body weight,BW)。分別于正式試驗(yàn)后0周(M0)、4周(M4)、8周(M8)、12周(M12)、16周(M16)每組隨機(jī)選取8只大鼠(雌雄各半)，尾靜脈取血1μl測(cè)糖化血紅蛋白(HbAlc)；然后用10％水合氯醛麻醉，下

4、腔靜脈取血5-7ml，注入普通試管，室溫下靜置1小時(shí)，血液自然凝固，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液，-80℃超低溫冰箱保存，待標(biāo)本收集齊全后同批采用酶聯(lián)免疫吸附法(EUSA)測(cè)定可溶性E-選擇素(sE-selectin)濃度。采用SPSS11.5醫(yī)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，所有數(shù)據(jù)在列表時(shí)均以X ±s表示，對(duì)所測(cè)定結(jié)果進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn)，組間比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析和q檢驗(yàn)，變量相關(guān)關(guān)系采用直線相關(guān)分析，以P值小

5、于0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1、實(shí)驗(yàn)過程中，無動(dòng)物意外死亡。成模前正常組大鼠體重穩(wěn)定增長，血糖處于正常水平(3.46±0.33mmol/1)；實(shí)驗(yàn)組大鼠體重增加較正常組快，成模前血糖亦處于正常水平(4.45±0.46mmol/1)。 2、正式實(shí)驗(yàn)后正常組大鼠隨周齡增長，體重穩(wěn)定增加；空腹血糖值穩(wěn)定，處于正常水平，各時(shí)間段之間無明顯差別(P>0.05)，sE-selectin濃度及HbAlc無顯著變化(P

6、>0.05)。 3、DM組大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，體重在M0-M8內(nèi)穩(wěn)定增加，M8后增加緩慢甚至降低，與正常組同時(shí)段比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見附表2：附圖1)，空腹血糖維持在較高水平(FBG>15m：mol/1)(見附表3；附圖2)。 4、DM組大鼠HbAlc逐漸升高，由M0時(shí)的5.33±0.40％漸增至M16時(shí)的11.00±0.65％，且分別于M8，M16周時(shí)明顯較前一時(shí)間點(diǎn)升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見附表4；附圖3)。 5

7、、DM組大鼠0周，4周，8周，12周，16周時(shí)血清可溶性E-選擇素(sE-selectin)濃度均高于正常對(duì)照組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。隨著糖尿病大鼠周齡的增加，可溶性E-選擇素濃度逐漸升高，由22.66±2.19ng/ml漸增至47.41±3.89ng/ml，且在8周，16周時(shí)的可溶性E-選擇素濃度較前明顯增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，而4周，12周時(shí)可溶性E-選擇素濃度均較前一時(shí)間點(diǎn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.01)(見附

8、表5；附圖4)。 6、HbAlc與sE-selectin在試驗(yàn)過程中變化趨勢(shì)一致，兩者呈明顯正相關(guān)關(guān)系(p<0.01)(見附表6；附圖5)。 結(jié)論： 本研究結(jié)果顯示2型糖尿病大鼠血清可溶性E-選擇素(sE-selectin)的濃度隨著病程的進(jìn)展逐漸增加，且與反映血糖水平的糖化血紅蛋白(HbAlc)呈正相關(guān)。2型糖尿病大鼠HbAlc>5％時(shí)可溶性E-選擇素濃度開始升高，HbAlc>8％時(shí)可溶性E-選擇素濃度明顯升高

9、，這將為2型糖尿病及其血管并發(fā)癥的早期防治和發(fā)病機(jī)制的研究提供理論依據(jù)。sE-selectin濃度的增加是由于高血糖導(dǎo)致糖基化終產(chǎn)物(AGEs)增加，刺激大量炎性細(xì)胞因子生成，進(jìn)而誘導(dǎo)E-selectin的表達(dá)。E-selectin濃度的明顯增加，促進(jìn)了白細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與了糖尿病大血管并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展；同時(shí)，E-selectin促進(jìn)白細(xì)胞的激活，釋放氧自由基，損傷內(nèi)皮導(dǎo)致血小板聚積，微小血栓形成，并刺激血管平滑肌細(xì)胞增生，