2型糖尿病大鼠血清L-選擇素的變化及意義.pdf

1、目的：近年來，2型糖尿病患病率逐年上升，其多種慢性并發(fā)癥嚴(yán)重威脅著生命健康，血管病變是糖尿病慢性并發(fā)癥共同的病理基礎(chǔ)和核心環(huán)節(jié)。隨著對糖尿病發(fā)病機(jī)制研究的深入，黏附分子在其血管并發(fā)癥發(fā)病過程中所起的作用，越來越受到重視。L-選擇素是細(xì)胞黏附分子選擇素家族的重要成員。近年的研究證實(shí)，L-選擇素通過促進(jìn)白細(xì)胞與血小板和內(nèi)皮細(xì)胞的黏附造成內(nèi)皮損傷和血管內(nèi)微血栓形成，在糖尿病大血管病變、微血管病變的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。但L-選擇素在糖尿

2、病病程中的變化及影響因素未見報(bào)道。本試驗(yàn)通過復(fù)制2型糖尿病大鼠模型，檢測不同病程糖尿病大鼠血清可溶性L-選擇素(sL-selectin)、血脂和糖化血紅蛋白的變化，探討L-選擇素的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，血脂、糖化血紅蛋白與可溶性L-選擇素的關(guān)系，為臨床早期發(fā)現(xiàn)、治療糖尿病慢性并發(fā)癥提供理論依據(jù)。 方法：健康7周齡清潔級近交系wistar大鼠120只，體重180-220g，雌雄各半，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，隨機(jī)分為兩組：正常組(control g

3、roup，CON)50只，試驗(yàn)組(trial grotlp，TRI)70只，雌雄各半。正常組動(dòng)物喂養(yǎng)普通飼料：蛋白質(zhì)占23％，碳水化合物占50％，脂肪占5％，其他22％；試驗(yàn)組動(dòng)物喂養(yǎng)高脂高糖飼料(由基礎(chǔ)飼料加蔗糖、煉豬油、雞蛋混合而成)，蛋白質(zhì)占15％，碳水化合物占51％，脂肪占25％，其他9％，使其產(chǎn)生胰島素抵抗。4周后試驗(yàn)組大鼠腹腔注射25mg/kg鏈脲佐菌素(STZ)(以PH4.4的0.1mmol/1檸檬酸鈉緩沖液配制成1％濃度

4、)，正常組大鼠腹腔注射等體積的0.1mmol/L無菌檸檬酸緩沖液，每周一次，連續(xù)兩周。兩周后給所有動(dòng)物行葡萄糖耐量試驗(yàn)(大鼠禁食12小時(shí)后尾靜脈取血測空腹血糖，按2g/kg體重灌胃50％葡萄糖溶液，2h后尾靜脈取血測2h血糖)，空腹血糖≥7.0mrnol/L，和(或)葡萄糖負(fù)荷后2小時(shí)血糖≥11.1mmol/L為造模成功。從造模成功者隨機(jī)選取大鼠50只(雌雄各半)納入正式試驗(yàn)，作為糖尿病組(diabetes group,DIA)。于0周

5、，4周，8周，12周，16周時(shí)，分別從正常組與糖尿病組中隨機(jī)選取10只(雌雄各半)處死，取血測定觀測值。對照組一直喂普通飼料，糖尿病組繼續(xù)喂高脂高糖飼料，每2周測空腹血糖(均為禁食10.12小時(shí)，尾靜脈取血)和體重。于試驗(yàn)第0、4、8、12、16周末禁食10-12小時(shí)，1％水合氯醛腹腔注射麻醉，下腔靜脈取血5-7ml注入普通試管，室溫下靜置1小時(shí)，血液自然凝固，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液，-80℃冰箱保存。待標(biāo)本收集齊全后同批

6、采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定可溶性L-選擇素(sL-selectin)，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測血脂，并于相應(yīng)時(shí)段尾靜脈取血測定糖化血紅蛋白(HbAlc％)。所有數(shù)據(jù)采用SAS6.10軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)數(shù)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析和Q檢驗(yàn)，兩變量間線性關(guān)系采用直線相關(guān)分析，P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1、試驗(yàn)過程中，無一例動(dòng)物死亡。成模前正常組大鼠隨年

7、齡增長，體重穩(wěn)定增加，血糖及糖化血紅蛋白均在正常范圍；試驗(yàn)組大鼠體重增長較正常組快，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血糖亦在正常范圍。 2、正式試驗(yàn)后正常組大鼠隨年齡增長，血糖穩(wěn)定，均在正常范圍，各時(shí)間段之間無明顯差別，高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、糖化血紅蛋白、可溶性L-選擇素均無明顯變化；糖尿病組大鼠隨著病程的延長，血糖處于較高水平，無明顯增高或降低，各時(shí)間段之間無明顯差別(P>0.05)；兩組大鼠的起始體重沒有變化，試驗(yàn)期間，

8、體重隨著時(shí)間的延伸規(guī)律性的增加，糖尿病組大鼠成模后體重增加較快，從第三周起，與正常組大鼠比較出現(xiàn)差異，差異逐漸增大直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束(p<0.01)。 3、糖尿病組大鼠0周時(shí)可溶性L-選擇素濃度與正常組相比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。隨著糖尿病病程的延長，可溶性L．選擇素濃度持續(xù)升高，與同時(shí)間段正常組相比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 4周，8周，12周，16周之間的可溶性L-選擇素濃度沒有明顯差別(P>0.05)，但與0周時(shí)相比較，差別明

9、顯(P<0.01)。 4、隨著糖尿病病程延長，糖尿病組大鼠低密度脂蛋白膽固醇逐漸增高，高密度脂蛋白膽固醇逐漸降低，與同時(shí)間段正常組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。 5、糖尿病組大鼠低密度脂蛋白膽固醇與可溶性L-選擇素呈正相關(guān)，高密度脂蛋白膽固醇與可溶性L-選擇素呈負(fù)相關(guān)；糖化血紅蛋白與可溶性L-選擇素呈正相關(guān)。 結(jié)論：本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示2型糖尿病大鼠血清可溶性L-選擇素與正常組相比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著，隨著糖尿

10、病病程的延長，可溶性L-選擇素持續(xù)升高。通過監(jiān)測2型糖尿病大鼠糖化血紅蛋白及低密度脂蛋白、高密度脂蛋白膽固醇，發(fā)現(xiàn)HbA<,1>c、LDL-C與sL-selectin呈正相關(guān)，HDL-C與sL-selectin成負(fù)相關(guān)。白細(xì)胞表面L-選擇素表達(dá)增加是白細(xì)胞激活的標(biāo)志，而白細(xì)胞激活參與糖尿病血管病變的發(fā)生、發(fā)展。因此，檢測sL-selectin可作為糖尿病慢性并發(fā)癥的監(jiān)測指標(biāo)。同時(shí)，LDL,-C、HDL C與HbA<,1>c密切相關(guān)，糖化